Lab Notebook

Lab Protocols

PCR (PrimeSTAR® HS DNA Polymerase)

• Ice
• Micro pipette**Thermal cycler
• PCR Tube
• Micro Tube
• DW
• 5× PCR Buffer
• dNTP　(2.5mM)
• Primer(Forward & Reverse)　 (20µM)
• Template DNA
• PrimeSTAR® HS DNA Polymerase　(2.5U/μl)

1. 以下の組成で、DW→Buffer→dNTP→primer→Template DNA→polymeraseの順に混ぜていく。反応液の調製は氷上で行う。Template DNAが液体の場合、その分DWの量を減らす。
2. 良く撹拌(×ボルテックス)した後、氷上のPCR Tubeに分注する（50µlずつ）
3. Thermal cyclerにセットし、RUNする。
   • 98℃・・・10sec
   • 55℃・・・5 or 15sec
   • 72℃・・・1min×1kbpごと 30cycle
4. 反応終了後、電気泳動にて結果を観察 or 4℃で保存。

Electrophoresis

Ethanol precipitation

Plasmid Extraction

Digestion

Ligation

Transformation

Colony PCR

Making Medium for Culture

Making Gel for Electrophoresis