"
Team:Tokyo Metropolitan/Notebook
From 2011.igem.org
(Difference between revisions)
(→PCR (PrimeSTAR® HS DNA Polymerase)) |
(→PCR (PrimeSTAR® HS DNA Polymerase)) |
||
| Line 206: | Line 206: | ||
=Lab Protocols= | =Lab Protocols= | ||
==PCR (PrimeSTAR® HS DNA Polymerase)== | ==PCR (PrimeSTAR® HS DNA Polymerase)== | ||
| - | *Ice | + | **Ice |
| - | *Micro pipette | + | **Micro pipette |
| - | *Thermal cycler | + | **Thermal cycler |
| - | *PCR Tube | + | **PCR Tube |
| - | *Micro Tube | + | **Micro Tube |
| - | *DW | + | **DW |
| - | *5× PCR Buffer | + | **5× PCR Buffer |
| - | *dNTP (2.5mM) | + | **dNTP (2.5mM) |
| - | *Primer(Forward & Reverse) (20µM) | + | **Primer(Forward & Reverse) (20µM) |
| - | *Template DNA | + | **Template DNA |
| - | *PrimeSTAR® HS DNA Polymerase (2.5U/μl) | + | **PrimeSTAR® HS DNA Polymerase (2.5U/μl) |
| + | |||
| + | |||
#以下の組成で、DW→Buffer→dNTP→primer→Template DNA→polymeraseの順に混ぜていく。反応液の調製は氷上で行う。Template DNAが液体の場合、その分DWの量を減らす。 | #以下の組成で、DW→Buffer→dNTP→primer→Template DNA→polymeraseの順に混ぜていく。反応液の調製は氷上で行う。Template DNAが液体の場合、その分DWの量を減らす。 | ||
#良く撹拌(×ボルテックス)した後、氷上のPCR Tubeに分注する（50µlずつ） | #良く撹拌(×ボルテックス)した後、氷上のPCR Tubeに分注する（50µlずつ） | ||
Revision as of 08:28, 4 October 2011
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
 |
Contents |
Lab Notebook
|
|
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Lab Protocols
PCR (PrimeSTAR® HS DNA Polymerase)
- Ice
- Micro pipette
- Thermal cycler
- PCR Tube
- Micro Tube
- DW
- 5× PCR Buffer
- dNTP (2.5mM)
- Primer(Forward & Reverse) (20µM)
- Template DNA
- PrimeSTAR® HS DNA Polymerase (2.5U/μl)
- 以下の組成で、DW→Buffer→dNTP→primer→Template DNA→polymeraseの順に混ぜていく。反応液の調製は氷上で行う。Template DNAが液体の場合、その分DWの量を減らす。
- 良く撹拌(×ボルテックス)した後、氷上のPCR Tubeに分注する（50µlずつ）
- Thermal cyclerにセットし、RUNする。
- 98℃・・・10sec
- 55℃・・・5 or 15sec
- 72℃・・・1min×1kbpごと 30cycle
- 反応終了後、電気泳動にて結果を観察 or 4℃で保存。
