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Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9J
From 2011.igem.org
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９月１日
Member
- 中川
- 1.QIAquick Gel Extraction Kitを使用してゲルからpSB1C3のDNAを抽出し、濃度を測定した。
- 2.8/30に再設計したプライマーを用いて以下の条件でBBa_E0240のPCRを行った。
PCR条件 10 µM GFP Primer F 1.5 µl 10 µM GFP Primer R 1.5 µl BBa_E0240 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 4 µl ddH2O 32 µl KOD Plus 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 95°C 30sec Denature 95°C 30sec 30 Cycle Anneling 50°C 1min Extension 68°C 1min End 4°C keep
Results
- 1.泳動後の写真
-
- 約2kbのところにバンドが見られた。
- 抽出したゲルのうち5 µlを20倍希釈し、吸光計で濃度測定をしたところ、濃度は17.8ng/µlと算出された。
1回目 0.019 2回目 0.013 3回目 0.019 4回目 0.022 5回目 0.016 ave. 0.0178
- 2.９月２日に続く
９月２日
Member
- 中川
- 昨日のBBa_E0240のPCR産物のフェノールクロロホルム処理、PCR産物の増幅を確認するための電気泳動、PCR産物の制限酵素処理を行った。
- 制限酵素処理は、下記の表に従って反応液を調整し、37°Cでインキュベートした。(overnight)
Results
- 泳動後の写真
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- PCR産物の増幅が確認できた。
９月３日
Member
- 中川
- QIAquick Gel Extraction Kitを使用して制限酵素処理済みのBBa_E0240をゲル抽出した。
Results
９月５日
Member
- 中川
Results
- コロニーは全く生えていなかった。
- インサートとベクターの量に注意して再度ライゲーションを行う。
９月６日
Member
- 吉村、中川
Results
- 4つのコロニーが確認できた。
９月７日
Member
- 中川
Results
９月８日
Member
- 中川
Results
９月９日
Member
- 中川
Results
９月１２日
Member
- 吉村、中川
Results
９月１３日
Member
- 吉村、中川
Results
９月１４日
Member
- 吉村、中川
- 1.PCRでFlag-MLFが増幅しているかを調べるため電気泳動を行った。
- 2.pSB1C3のアルカリミニプレップ、フェノールクロロホルム処理、制限酵素処理
Results
- 泳動後の写真
</body>
- ゲルの濃度を2倍にしたところ、マーカーが流れなかったので、Flag-tag MLFの電気泳動に関しては今後、2%のアガロースゲルで行うこととする。
