Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9J
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9月1日
Member
- 中川
- 1.QIAquick Gel Extraction Kitを使用してゲルからpSB1C3のDNAを抽出し、濃度を測定した。
- 2.8/30に再設計したプライマーを用いて以下の条件でBBa_E0240のPCRを行った。
PCR条件 10 µM GFP Primer F 1.5 µl 10 µM GFP Primer R 1.5 µl BBa_E0240 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 4 µl ddH2O 32 µl KOD Plus 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 95°C 30sec Denature 95°C 30sec 30 Cycle Anneling 50°C 1min Extension 68°C 1min End 4°C keep
Results
- 1.泳動後の写真
-
- 約2kbのところにバンドが見られた。
- 抽出したゲルのうち5 µlを20倍希釈し、吸光計で濃度測定をした。
1回目 0.019 2回目 0.013 3回目 0.019 4回目 0.022 5回目 0.016 ave. 0.0178
- 濃度は17.8ng/µlと算出された。
- 2.9月2日に続く
9月2日
Member
- 中川
- 昨日のBBa_E0240のPCR産物のフェノールクロロホルム処理、PCR産物の増幅を確認するための電気泳動、PCR産物の制限酵素処理を行った。
- 制限酵素処理は、下記の表に従って反応液を調整し、37°Cでインキュベートした。(overnight)
Results
- 泳動後の写真
-
- PCR産物の増幅が確認できた。
9月3日
Member
- 中川
Results
9月5日
Member
- 中川
Results
- コロニーは全く生えていなかった。
- インサートとベクターの量に注意して再度ライゲーションを行う。
9月6日
Member
- 吉村、中川
Results
- 4つのコロニーが確認できた。
9月6日
Member
- 吉村
- pSB1C3のトランスフォーメーション
Results
- 小さいコロニーの生育がみられた。
9月7日
Member
- 吉村、中川
- pSB1C3のプレカルチャー(6サンプル)
Results
- 6サンプルのうち3サンプルは培養に成功した。
- 3サンプルはコンタミの可能性があるため、念を入れて翌日もプレカルチャーを行うことにした。
9月8日
Member
- 中川
- 1.pSB1C3のプレカルチャー(6サンプル)
- 2.プライマーの再設計
Results
- 1.コンタミすることなく培養に成功した。
- 2.以下のように設計した。
- F: 3' TTGAATTCTTTTCTAGATTTCGTAAAGGAGAAGAA
- F: 3' TTGAATTCTTTTCTAGATTTCGTAAAGGAGAAGAA
EcoRⅠ XbaⅠ
- Tm値:68.8゜C 35塩基
- Tm値:68.8゜C 35塩基
8月31日
Member
- 中川
- pSB1C3のアルカリミニプレップ、フェノールクロロホルム処理をした後、下表に従って、30分37℃で制限酵素処理を行った。
ddH2O 2 µl BBa_E0240 50 µl EcoRⅠ 1 µl PstⅠ 1 µl 10 x H Buffer 6 µl total 60 µl
- 制限酵素処理後、100 V 30minで電気泳動を行った。
Results
- 泳動後の写真
-
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