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Team:Lyon-INSA-ENS/Realisation/ProtocolsFr
From 2011.igem.org
Conditions générales de culture
Antibiotics were used at the following concentrations :
Ampiciline (Amp) : 100µg/mL
Chloramphenicol (Cm) : 20µg/mL
Spectinomycine (Spc) : 100µg/mL
Kanamycine (Kan) : 30µg/mL
Pour le chloramphenicol, le solvant est un mélange 70/30 (v/v) eau/éthanol ; les autres antibiotiques ont été dissouts dans l'eau. Tous les volumes sont calculés pour une solution mère 10X.
La composition des différents milieux que nous avons utilisés est la suivante :
LB : 10 g de tryptone, 5 g d'extarit de levure et 10g de NaCl pour 1L de LB liquide. Le LB solide pour les boîtes est réalisé par addition d'agar pour atteindre une concentration de 1.5%.
M63G : 100/1/1 (v/v/v) de M63, glucose 20% et LB.
LB/2 : un mélange 50/50 (v/v) de LB et eau.
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. Transformation chimique au CaCl2
. Ligation
. NucleoSpin Plasmid QuickPure : Isolation d'ADN plasmidien à haut nombre de copies depuis E.Coli
. Purification d'ADN plasmidien utilisant les kits HiSpeed plasmid midi
. Purification d'ADN plasmidien utilisant le kit de miniprep QIAprep® Spin
