Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9J

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９月１日

Member

中川


1.QIAquick Gel Extraction Kitを使用してゲルからpSB1C3のDNAを抽出し、濃度を測定した。
2.8/30に再設計したプライマーを用いて以下の条件でBBa_E0240のPCRを行った。


PCR条件
10 µM GFP Primer F1.5 µl
10 µM GFP Primer R1.5 µl
BBa_E02401 µl
10 x PCR Buffer for KOD Plus5 µl
dNTPs4 µl
MgSO44 µl
ddH2O32 µl
KOD Plus1 µl
 total 50 µl
Cycle条件
Pre-Denature95°C30sec 
Denature95°C30sec30 Cycle
Anneling50°C1min
Extension68°C1min
End4°Ckeep 




Results

1.泳動後の写真

約2kbのところにバンドが見られた。


抽出したゲルのうち5 µlを20倍希釈し、吸光計で濃度測定をした。


1回目0.019
2回目0.013
3回目0.019
4回目0.022
5回目0.016
ave.0.0178


濃度は17.8ng/µlと算出された。


2.９月２日に続く


９月２日

Member

中川


昨日のBBa_E0240のPCR産物のフェノールクロロホルム処理、PCR産物の増幅を確認するための電気泳動、PCR産物の制限酵素処理を行った。
制限酵素処理は、下記の表に従って反応液を調整し、37°Cでインキュベートした。(overnight)



Results

泳動後の写真


PCR産物の増幅が確認できた。


９月３日

Member

中川


<a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用して制限酵素処理済みのBBa_E0240をゲル抽出した。


Results


９月５日

Member

中川



Results

コロニーは全く生えていなかった。
インサートとベクターの量に注意して再度ライゲーションを行う。


９月６日

Member

吉村、中川



Results

4つのコロニーが確認できた。


９月７日

Member

中川



Results


９月８日

Member

中川



Results


９月９日

Member

中川



Results



９月１２日

Member

吉村、中川



Results

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