Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9J
From 2011.igem.org
(Difference between revisions)
(→9月8日) |
(→9月7日) |
||
(37 intermediate revisions not shown) | |||
Line 1: | Line 1: | ||
{{Template:KIT-Kyoto/Notebook}} | {{Template:KIT-Kyoto/Notebook}} | ||
- | {{Template:KIT-Kyoto/ | + | {{Template:KIT-Kyoto/menuJ}} |
<BR> | <BR> | ||
Line 6: | Line 6: | ||
<div id=NAKAMI> | <div id=NAKAMI> | ||
{| style="color:#000080;background-color:transparent;" cellpadding="3" cellspacing="1" border="0" bordercolor="#0000FF" width="900px" align="center" | {| style="color:#000080;background-color:transparent;" cellpadding="3" cellspacing="1" border="0" bordercolor="#0000FF" width="900px" align="center" | ||
- | !align="left"|[[Team:KIT-Kyoto|Home]] > [[Team:KIT-Kyoto/ | + | !align="left"|[[Team:KIT-Kyoto/homeJ|Home]] > [[Team:KIT-Kyoto/NotebookJ|Notebook]] > [[Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNoteJ|Lab Note]] > [[Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9J|September]] |
!align="right"|Language:[[Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9|English]]/[[Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9J|Japanese]] | !align="right"|Language:[[Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9|English]]/[[Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9J|Japanese]] | ||
|} | |} | ||
Line 15: | Line 15: | ||
:中川 | :中川 | ||
<br> | <br> | ||
- | :1. | + | :1.[http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx QIAquick Gel Extraction Kit]を使用してゲルからpSB1C3のDNAを抽出し、濃度を測定した。 |
+ | |||
:2.8/30に再設計したプライマーを用いて以下の条件でBBa_E0240のPCRを行った。 | :2.8/30に再設計したプライマーを用いて以下の条件でBBa_E0240のPCRを行った。 | ||
<BR> | <BR> | ||
- | |||
:<table border="0"><tr><td> | :<table border="0"><tr><td> | ||
:<table border="0" width="150px"> | :<table border="0" width="150px"> | ||
Line 58: | Line 58: | ||
<BR> | <BR> | ||
- | :抽出したゲルのうち5 | + | :抽出したゲルのうち5 µlを20倍希釈し、吸光計で濃度測定をしたところ、濃度は17.8ng/µlと算出された。<BR> |
<BR> | <BR> | ||
:<table border=1 width="160px"> | :<table border=1 width="160px"> | ||
Line 70: | Line 70: | ||
<BR> | <BR> | ||
- | |||
<BR> | <BR> | ||
:2.9月2日に続く<BR> | :2.9月2日に続く<BR> | ||
Line 99: | Line 98: | ||
:中川 | :中川 | ||
<br> | <br> | ||
- | : | + | :[http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx QIAquick Gel Extraction Kit]を使用して制限酵素処理済みのBBa_E0240をゲル抽出した。<BR> |
<br> | <br> | ||
<b>Results</b> | <b>Results</b> | ||
- | : | + | :<html><body> |
+ | <IMG src="https://static.igem.org/mediawiki/2011/b/bb/2011.09.03_%E4%B8%AD%E5%B7%9D%E3%82%B2%E3%83%AB%E6%8A%BD%E5%87%BA.JPG" width="250px" height="250px" border="0"> | ||
+ | </body></html><BR> | ||
<BR> | <BR> | ||
Line 110: | Line 111: | ||
:中川<br> | :中川<br> | ||
<br> | <br> | ||
+ | :下表に従ってpSB1C3(19 ng/µl)とBBa_E0240(noATG GFP、25 ng/µl)のライゲーションを行った。<BR> | ||
+ | <BR> | ||
+ | :<table border=1 width="200px"> | ||
+ | :<tr><td width="130px" align=center>BBa_E0240</td><td width="70px" align=right>0.5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>pSB1C3</td><td align=right>0.5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>10 x Buffer</td><td align=right>2.5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>F4 ligase</td><td align=right>0.5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>1.0 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td> </td><td align=right>total 5 µl</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | |||
+ | <BR> | ||
+ | |||
+ | :16°C、30minでincubateした後、形質転換を行った。<BR> | ||
+ | |||
+ | |||
<br> | <br> | ||
Line 122: | Line 139: | ||
:吉村、中川<br> | :吉村、中川<br> | ||
<br> | <br> | ||
- | : | + | :1.ベクターとインサートの濃度比を1:9にして昨日と同様にライゲーションを行った。 |
+ | :2.Flag-tag dMLFのプライマー設計 | ||
<br> | <br> | ||
<b>Results</b> | <b>Results</b> | ||
- | : | + | :1.翌日、4つのコロニーが確認できた。 |
+ | :2.F:AAA<font color="#ff0000">GAATTC</font>AAA<font color="#ff0000">TCTAGA</font>AAAATGGACTACAAGGACGA<br> | ||
+ | : <em>Eco</em>RⅠ <em>Xba</em>Ⅰ<br> | ||
+ | :Tm値:72.14℃ 38塩基<br> | ||
+ | :R:AAA<font color="#ff0000">CTGCAG</font>AAA<font color="#ff0000">ACTAGT</font>AAATACCCTACTTCTTCTTGCC<br> | ||
+ | : <em>Pst</em>Ⅰ <em>Spe</em>Ⅰ<br> | ||
+ | :Tm値:72.16℃ 40塩基<br> | ||
<br> | <br> | ||
Line 133: | Line 157: | ||
:中川 | :中川 | ||
<br> | <br> | ||
- | : | + | :1.昨日ライゲーションしてできたコロニーのプレカルチャー<BR> |
- | < | + | :2.pSB1C3のプレカルチャー<BR> |
+ | :3.以下のプログラムでFlag-tag dMLFのPCRを行った。 | ||
+ | :<table border="0"><tr><td> | ||
+ | :<table border="0" width="150px"> | ||
+ | :<tr><td align=center>PCR条件</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :<table border=1 width="250px"> | ||
+ | :<tr><td width="150px" align=center>10 µM GFP Primer F</td><td width="100px" align=right>1.5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>10 µM GFP Primer R</td><td align=right>1.5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Flag tag dMLF</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>10 x PCR Buffer for KOD Plus</td><td align=right>5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>dNTPs</td><td align=right>4 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>MgSO<sub>4</sub></td><td align=right>4 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>32 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>KOD Plus</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td> </td><td align=right>total 50 µl</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :</td><TD></TD><TD></TD><td> | ||
+ | :<table border="0" width="100px"> | ||
+ | :<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :<table border=1 width="400px"> | ||
+ | :<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px" align=center>95°C</td><td width="100px" align=center>30sec</td><td width="100px"> </td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>95°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>30 Cycle</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>50°C</td><td align=center>1min</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>68°C</td><td align=center>1min</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px"> </td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | <BR> | ||
+ | :下表に従ってPCR産物の制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)<BR> | ||
+ | :<table border=1 width="220px"> | ||
+ | :<tr><td width="130px" align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td width="90px" align=right>2 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Flag-tag dMLF</td><td align=right>50 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center><em>Eco</em>RⅠ</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center><em>Pst</em>Ⅰ</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>10 x H Buffer</td><td align=right>6 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center> </td><td align=right>total 60 µl</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | <BR> | ||
<b>Results</b> | <b>Results</b> | ||
: | : | ||
Line 144: | Line 208: | ||
:中川 | :中川 | ||
<br> | <br> | ||
- | : | + | :1.Flag tag dMLFのゲル抽出 |
+ | :2.pSB1C3のアルカリミニプレップをした後、フェノールクロロホルム処理をした後、下表に従って制限酵素処理を行った。(37°C、overnight) | ||
+ | :<table border=1 width="220px"> | ||
+ | :<tr><td width="130px" align=center>pSB1C3in ddH<sub>2</sub>O</td><td width="90px" align=right>50 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center><em>EcoR</em>Ⅰ</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center><em>Pst</em>Ⅰ</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>10 x H Buffer</td><td align=right>6 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center> </td><td align=right>total 58 µl</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :37°Cで20時間静置した。 | ||
<br> | <br> | ||
<b>Results</b> | <b>Results</b> | ||
- | : | + | :1.MLFを切り出すときにほとんどバンドは見えなかった。 |
+ | :そこでまずはベクターとGFPのライゲーションに明日から力を入れることにした。 | ||
<br> | <br> | ||
Line 155: | Line 229: | ||
:中川<br> | :中川<br> | ||
<br> | <br> | ||
- | : | + | :ベクターとGFPのライゲーションのためのエタノール沈殿 |
- | < | + | :エタノール沈殿をすることでベクターとGFPの濃度をあげ、ライゲーションの効率を上げる<BR> |
+ | <BR><BR> | ||
<b>Results</b> | <b>Results</b> | ||
- | : | + | :エタノール沈殿に失敗し沈殿すべきDNAが見当たらず濃度を濃く出来なくなった。 |
<br> | <br> | ||
<br> | <br> | ||
- | =='' | + | ==''9月12日''== |
<b>Member</b> | <b>Member</b> | ||
<br> | <br> | ||
- | : | + | :吉村、中川<br> |
<br> | <br> | ||
- | : | + | :9/6に作製したプライマーを用いて、Flag-tag dMLFについて以下の2条件で各1サンプルずつPCRを行った。 |
- | :<table border | + | :<table border="0"><tr><td> |
- | + | :<table border="0" width="150px"> | |
- | :<tr><td align=center> | + | :<tr><td align=center>PCR条件(1)</td></tr> |
- | :<tr><td align=center>< | + | :</table> |
- | :<tr><td align=center>< | + | :<table border=1 width="250px"> |
- | :<tr><td align=center> | + | :<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="100px" align=right>1.5 µl</td></tr> |
- | :<tr><td align=center> </td><td align=right>total | + | :<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>1.5 µl</td></tr> |
+ | :<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>10 x PCR Buffer for KOD Plus</td><td align=right>5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>dNTPs</td><td align=right>4 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>MgSO<sub>4</sub></td><td align=right>4 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>32 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>KOD Plus</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td> </td><td align=right>total 50 µl</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :</td><TD></TD><TD></TD><td> | ||
+ | :<table border="0" width="100px"> | ||
+ | :<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :<table border=1 width="400px"> | ||
+ | :<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px" align=center>94°C</td><td width="100px" align=center>2min</td><td width="100px"> </td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>15sec</td><td align=center rowspan=3>35 Cycle</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>55°C</td><td align=center>30sec</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>68°C</td><td align=center>1min 20sec</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px"> </td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :</td></tr> | ||
:</table> | :</table> | ||
<br> | <br> | ||
- | : | + | :<table border="0"><tr><td> |
+ | :<table border="0" width="150px"> | ||
+ | :<tr><td align=center>PCR条件(2)</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :<table border=1 width="250px"> | ||
+ | :<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="100px" align=right>1.5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>1.5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>10 x PCR Buffer for KOD Plus</td><td align=right>5 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>dNTPs</td><td align=right>4 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>MgSO<sub>4</sub></td><td align=right>2 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>34 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>KOD Plus</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | :<tr><td> </td><td align=right>total 50 µl</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :</td><TD></TD><TD></TD><td> | ||
+ | :<table border="0" width="100px"> | ||
+ | :<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :<table border=1 width="400px"> | ||
+ | :<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px" align=center>94°C</td><td width="100px" align=center>2min</td><td width="100px"> </td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>15sec</td><td align=center rowspan=3>35 Cycle</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>55°C</td><td align=center>30sec</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>68°C</td><td align=center>1min 20sec</td></tr> | ||
+ | :<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px"> </td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | :</td></tr> | ||
+ | :</table> | ||
+ | |||
+ | :各サンプルを回収し、-20゜Cで保存した。 | ||
+ | |||
+ | |||
+ | |||
<br> | <br> | ||
<b>Results</b> | <b>Results</b> | ||
- | : | + | : |
- | + | <BR> | |
- | + | ||
- | + | ||
+ | ==''9月13日''== | ||
+ | <b>Member</b> | ||
+ | <br> | ||
+ | :吉村、中川<br> | ||
+ | <br> | ||
+ | : | ||
+ | |||
+ | <br> | ||
+ | <b>Results</b> | ||
+ | : | ||
+ | <BR> | ||
+ | |||
+ | ==''9月14日''== | ||
+ | <b>Member</b> | ||
+ | <br> | ||
+ | :吉村、中川<br> | ||
+ | <br> | ||
+ | :1.PCRでFlag-MLFが増幅しているかを調べるため電気泳動を行った。 | ||
+ | :2.pSB1C3のアルカリミニプレップ、フェノールクロロホルム処理、制限酵素処理 | ||
+ | |||
+ | |||
+ | <br> | ||
+ | <b>Results</b> | ||
+ | :泳動後の写真<BR> | ||
+ | :<html><body><IMG src="https://static.igem.org/mediawiki/2011/5/53/2011.09.14MLF-PCR%E3%83%81%E3%82%A7%E3%83%83%E3%82%AF.JPG | ||
+ | " width="240px" height="280px" border="0"></body></html> | ||
+ | <BR> | ||
+ | :ゲルの濃度を2倍にしたところ、マーカーが流れなかったので、Flag-tag MLFの電気泳動に関しては今後、2%のアガロースゲルで行うこととする。<BR> | ||
</div> | </div> |
Latest revision as of 00:21, 6 October 2011
![]() |
|
Home | Team | Project | Parts | Notebook | Safety | Human Practice | Attributions |
---|
Home > Notebook > Lab Note > September | Language:English/Japanese |
---|
9月1日
Member
- 中川
- 1.[http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx QIAquick Gel Extraction Kit]を使用してゲルからpSB1C3のDNAを抽出し、濃度を測定した。
- 2.8/30に再設計したプライマーを用いて以下の条件でBBa_E0240のPCRを行った。
PCR条件 10 µM GFP Primer F 1.5 µl 10 µM GFP Primer R 1.5 µl BBa_E0240 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 4 µl ddH2O 32 µl KOD Plus 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 95°C 30sec Denature 95°C 30sec 30 Cycle Anneling 50°C 1min Extension 68°C 1min End 4°C keep
Results
- 1.泳動後の写真
-
- 約2kbのところにバンドが見られた。
- 抽出したゲルのうち5 µlを20倍希釈し、吸光計で濃度測定をしたところ、濃度は17.8ng/µlと算出された。
1回目 0.019 2回目 0.013 3回目 0.019 4回目 0.022 5回目 0.016 ave. 0.0178
- 2.9月2日に続く
9月2日
Member
- 中川
- 昨日のBBa_E0240のPCR産物のフェノールクロロホルム処理、PCR産物の増幅を確認するための電気泳動、PCR産物の制限酵素処理を行った。
- 制限酵素処理は、下記の表に従って反応液を調整し、37°Cでインキュベートした。(overnight)
Results
- 泳動後の写真
-
- PCR産物の増幅が確認できた。
9月3日
Member
- 中川
- [http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx QIAquick Gel Extraction Kit]を使用して制限酵素処理済みのBBa_E0240をゲル抽出した。
Results
9月5日
Member
- 中川
- 下表に従ってpSB1C3(19 ng/µl)とBBa_E0240(noATG GFP、25 ng/µl)のライゲーションを行った。
BBa_E0240 0.5 µl pSB1C3 0.5 µl 10 x Buffer 2.5 µl F4 ligase 0.5 µl ddH2O 1.0 µl total 5 µl
- 16°C、30minでincubateした後、形質転換を行った。
Results
- コロニーは全く生えていなかった。
- インサートとベクターの量に注意して再度ライゲーションを行う。
9月6日
Member
- 吉村、中川
- 1.ベクターとインサートの濃度比を1:9にして昨日と同様にライゲーションを行った。
- 2.Flag-tag dMLFのプライマー設計
Results
- 1.翌日、4つのコロニーが確認できた。
- 2.F:AAAGAATTCAAATCTAGAAAAATGGACTACAAGGACGA
- EcoRⅠ XbaⅠ
- Tm値:72.14℃ 38塩基
- R:AAACTGCAGAAAACTAGTAAATACCCTACTTCTTCTTGCC
- PstⅠ SpeⅠ
- Tm値:72.16℃ 40塩基
9月7日
Member
- 中川
- 1.昨日ライゲーションしてできたコロニーのプレカルチャー
- 2.pSB1C3のプレカルチャー
- 3.以下のプログラムでFlag-tag dMLFのPCRを行った。
PCR条件 10 µM GFP Primer F 1.5 µl 10 µM GFP Primer R 1.5 µl Flag tag dMLF 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 4 µl ddH2O 32 µl KOD Plus 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 95°C 30sec Denature 95°C 30sec 30 Cycle Anneling 50°C 1min Extension 68°C 1min End 4°C keep
- 下表に従ってPCR産物の制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)
ddH2O 2 µl Flag-tag dMLF 50 µl EcoRⅠ 1 µl PstⅠ 1 µl 10 x H Buffer 6 µl total 60 µl
Results
9月8日
Member
- 中川
- 1.Flag tag dMLFのゲル抽出
- 2.pSB1C3のアルカリミニプレップをした後、フェノールクロロホルム処理をした後、下表に従って制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)
pSB1C3in ddH2O 50 µl EcoRⅠ 1 µl PstⅠ 1 µl 10 x H Buffer 6 µl total 58 µl - 37°Cで20時間静置した。
Results
- 1.MLFを切り出すときにほとんどバンドは見えなかった。
- そこでまずはベクターとGFPのライゲーションに明日から力を入れることにした。
9月9日
Member
- 中川
- ベクターとGFPのライゲーションのためのエタノール沈殿
- エタノール沈殿をすることでベクターとGFPの濃度をあげ、ライゲーションの効率を上げる
Results
- エタノール沈殿に失敗し沈殿すべきDNAが見当たらず濃度を濃く出来なくなった。
9月12日
Member
- 吉村、中川
- 9/6に作製したプライマーを用いて、Flag-tag dMLFについて以下の2条件で各1サンプルずつPCRを行った。
PCR条件(1) 10 µM Primer F 1.5 µl 10 µM Primer R 1.5 µl Template DNA 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 4 µl ddH2O 32 µl KOD Plus 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min Denature 94°C 15sec 35 Cycle Anneling 55°C 30sec Extension 68°C 1min 20sec End 4°C keep
PCR条件(2) 10 µM Primer F 1.5 µl 10 µM Primer R 1.5 µl Template DNA 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 2 µl ddH2O 34 µl KOD Plus 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min Denature 94°C 15sec 35 Cycle Anneling 55°C 30sec Extension 68°C 1min 20sec End 4°C keep
- 各サンプルを回収し、-20゜Cで保存した。
Results
9月13日
Member
- 吉村、中川
Results
9月14日
Member
- 吉村、中川
- 1.PCRでFlag-MLFが増幅しているかを調べるため電気泳動を行った。
- 2.pSB1C3のアルカリミニプレップ、フェノールクロロホルム処理、制限酵素処理
Results
- 泳動後の写真
- ゲルの濃度を2倍にしたところ、マーカーが流れなかったので、Flag-tag MLFの電気泳動に関しては今後、2%のアガロースゲルで行うこととする。