Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9J

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Revision as of 17:40, 3 October 2011

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９月１日

Member

中川

1.QIAquick Gel Extraction Kitを使用してゲルからpSB1C3のDNAを抽出し、濃度を測定した。

2.8/30に再設計したプライマーを用いて以下の条件でBBa_E0240のPCRを行った。

PCR条件

10 µM GFP Primer F	1.5 µl
10 µM GFP Primer R	1.5 µl
BBa_E0240	1 µl
10 x PCR Buffer for KOD Plus	5 µl
dNTPs	4 µl
MgSO₄	4 µl
ddH₂O	32 µl
KOD Plus	1 µl
	total 50 µl

Cycle条件

Pre-Denature	95°C	30sec
Denature	95°C	30sec	30 Cycle
Anneling	50°C	1min
Extension	68°C	1min
End	4°C	keep

Results

1.泳動後の写真

約2kbのところにバンドが見られた。

抽出したゲルのうち5 µlを20倍希釈し、吸光計で濃度測定をした。

1回目	0.019
2回目	0.013
3回目	0.019
4回目	0.022
5回目	0.016
ave.	0.0178

濃度は17.8ng/µlと算出された。

2.９月２日に続く

９月２日

Member

中川

昨日のBBa_E0240のPCR産物のフェノールクロロホルム処理、PCR産物の増幅を確認するための電気泳動、PCR産物の制限酵素処理を行った。

制限酵素処理は、下記の表に従って反応液を調整し、37°Cでインキュベートした。(overnight)

Results

泳動後の写真

PCR産物の増幅が確認できた。

９月３日

Member

中川

QIAquick Gel Extraction Kitを使用して制限酵素処理済みのBBa_E0240をゲル抽出した。

Results

９月５日

Member

中川

Results

コロニーは全く生えていなかった。

インサートとベクターの量に注意して再度ライゲーションを行う。

９月６日

Member

吉村、中川

Results

4つのコロニーが確認できた。

９月７日

Member

中川

Results

９月８日

Member

中川

Results

９月９日

Member

中川

Results

９月１２日

Member

吉村、中川

Results

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 :1.<html><body><a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a></body></html>を使用してゲルからpSB1C3のDNAを抽出し、濃度を測定した。
 :2.8/30に再設計したプライマーを用いて以下の条件でBBa_E0240のPCRを行った。
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