Team:Lyon-INSA-ENS/Realisation/ProtocolsFr

Conditions générales de culture

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Les antibiotiques ont été utilisés aux concentrations suivantes :
Ampiciline (Amp) : 100µg/mL
Chloramphenicol (Cm) : 20µg/mL
Spectinomycine (Spc) : 100µg/mL
Kanamycine (Kan) : 30µg/mL
Pour le chloramphenicol, le solvant est un mélange 70/30 (v/v) eau/éthanol ; les autres antibiotiques ont été dissouts dans l'eau. Tous les volumes sont calculés pour une solution mère 10X.

La composition des différents milieux que nous avons utilisés est la suivante :
LB : 10 g de tryptone, 5 g d'extarit de levure et 10g de NaCl pour 1L de LB liquide. Le LB solide pour les boîtes est réalisé par addition d'agar pour atteindre une concentration de 1.5%.
M63G : 100/1/1 (v/v/v) de M63, glucose 20% et LB.
LB/2 : un mélange 50/50 (v/v) de LB et eau.

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. Quantification de biofilms

. Transformation chimique au CaCl2

. Digestion Fermentas

. Ligation

. Kit de miniprepMacherey-Nagel

. Digestion Ozyme

. Coulage de boîtes

. Kit de midiprep QIAGen

. Kit de miniprep QIAGen

. Mise en collection de souches

. Transformation chimique au TSS