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Team:KIT-Kyoto/GFP-MLF実験かんたん
From 2011.igem.org
8/22(月)
吉村、中川、松浪
・BBa_E0240のトランスフォーメーション
【結果】
コロニーの生育がみられた。
8/23(火)
吉村、中川
・BBa_E0240のプレカルチャー
【結果】
全てのサンプルに大腸菌の増殖がみられた。
・BBa_E0240からno ATG GFPを作るため以下のようにプライマー設計をした。
F: 3' TTGAATTCTTTCTAGATTCGTAAAGGAGAAGAA
EcoRⅠ XbaⅠ
Tm値:67.75゜C 33塩基
R: 5' AAACTGCAGAAAACTAGTTTTTTATTATTTGTATAG
PstⅠ SpeⅠ
Tm値:67.66゜C 36塩基
8/24(水) 11:00～
吉村、中川
BBa_E0240のアルカリミニプレップをした後、下表に従って、30分37℃で制限酵素処理を行った。
| ddH2O | 2 µl |
| BBa_E0240 | 50 µl |
| EcoRⅠ | 1 µl |
| PstⅠ | 1 µl |
| 10 x H Buffer | 6 µl |
| total 60 µl |
制限酵素処理後、100 V 30minで電気泳動した。
【結果】
泳動後の写真
800bpあたりにバンドが出ていた。
8/25(木) 11:00～
吉村、中川
8/23に設計したプライマーを用いて、以下の条件でPCRを行った。
|
|
PCR産物が増幅していることを確認するため、アガロース電気泳動を行った。
泳動後の写真
800bpあたりにバンドが見られ、PCR産物の増幅が確認できた。
PCR産物の増幅を確認した後、下表に従ってPCR産物の制限酵素処理を行った。(37゜C、overnight)。
| ddH2O | 2 µl |
| BBa_E0240 | 50 µl |
| EcoRⅠ | 1 µl |
| PstⅠ | 1 µl |
| 10 x H Buffer | 6 µl |
| total 60 µl |
8/26(金)
中川 17:00～
・ゲルからのDNA抽出
ゲル切り出し後の写真
濃度は510 ng/µlだった。
・pSB1C3のトランスフォーメーション
【結果】
小さいが、コロニーが生えていた。
念のために、翌日再度トランスフォーメーションをする。
8/27(土)
吉村
pSB1C3のトランスフォーメーション
【結果】
小さいコロニーの生育がみられた。
8/29(月)
中川
・pSB1C3のプレカルチャーを6サンプル行った。
【結果】
6サンプルのうち3サンプルは培養に成功したが、3サンプルはコンタミの可能性があるため、念を入れて翌日もプレカルチャーを行うことにした。
8/30(火)
中川
大会提出用ベクターpSB1C3のプレカルチャーを6サンプル行った。
【結果】
コンタミすることなく培養に成功した。
・8/23に設計したプライマーだと、フレームシフトをおこしている可能性があったため、プライマーの再設計を行った。
F: 3' TTGAATTCTTTTCTAGATTTCGTAAAGGAGAAGAA
EcoRⅠ XbaⅠ
Tm値:68.8゜C 35塩基
8/31(水)
中川
pSB1C3のアルカリミニプレップ、フェノールクロロホルム処理をした後、下表に従って、30分37℃で制限酵素処理を行った。
| ddH2O | 2 µl |
| BBa_E0240 | 50 µl |
| EcoRⅠ | 1 µl |
| PstⅠ | 1 µl |
| 10 x H Buffer | 6 µl |
| total 60 µl |
制限酵素処理後、100 V 30minで電気泳動した。
【結果】
泳動後の写真
