Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF8J

８月２２日

Member

吉村、中川、松浪

Purpose

BBa_E0240のトランスフォーメーション

Results

コロニーの生育がみられた。

８月２３日

Member

吉村、中川

Purpose

1.BBa_E0240のプレカルチャー

2.BBa_E0240からATG GFPを作るためのプライマー設計

Results

1.全てのサンプルに大腸菌の増殖がみられた。

2.以下のように設計した。

F: 3' TTGAATTCTTTCTAGATTCGTAAAGGAGAAGAA

　　　　　EcoRⅠ　　　　XbaⅠ

Tm値:67.75゜C　　33塩基

R: 5' AAACTGCAGAAAACTAGTTTTTTATTATTTGTATAG

　　　　　 PstⅠ　　　　　SpeⅠ

Tm値:67.66゜C　　36塩基

８月２４日

Member
吉村、中川
Purpose

BBa_E0240のアルカリミニプレップ

BBa_E0240の電気泳動

Method

BBa_E0240のアルカリミニプレップをした後、下表に従って、30分37℃で制限酵素処理を行った。

ddH2O	2 µl
BBa_E0240	50 µl
EcoRⅠ	1 µl
PstⅠ	1 µl
10 x H Buffer	6 µl
	total 60 µl

制限酵素処理後、100 V 30minで電気泳動した。

Results

泳動後の写真

800bpあたりにバンドが出ていた。

８月２５日

Member
吉村、中川

Purpose

PCR(23日に作製したプライマーを用いた)

アガロース電気泳動(PCR産物の増幅確認)

Method
以下の条件でPCRを行った。

PCR条件 10 µM GFP Primer F 1.5 µl 10 µM GFP Primer R 1.5 µl BBa_E0240 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 4 µl ddH2O 32 µl KOD Plus 1 µl   total 50 µl

Cycle条件 Start 95°C、30秒 Cycle x 30 95°C、30秒(熱変性) 50°C、1分(アニーリング) 68°C、1kb/分(伸長) End 4°Cで保持

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