Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNoteJ/DIAP2-MALTJ9

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９月１日

Member

武田

DIAP2について、以下の条件でPCRを行った。

PCR条件 10 µM Primer F 1.5 µl 10 µM Primer R 1.5 µl Template DNA 1 µl 10 x PCR Buffer 5 µl dNTPs 5 µl MgSO4 2 µl or 4 µl ddH2O 33 µl or 31 µl KOD+ polymelase 1 µl   total 50 µl

Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min   Denature 94°C 15sec 35 Cyle Anneling 50.5°C 30sec Extension 68°C 100sec End 4°C keep

PCR産物が増幅していることを確認するため、アガロース電気泳動を行った。

Results

泳動後の写真

正しい位置にバンドが見られた。

９月５日

Member

横井川

1日に確認したDIAP2をフェノールクロロホルム処理し、下表に従って制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)

DIAP2

PCR産物 in ddH2O	44 μl
10 x H Buffer	5 μl
XhoⅠ	1 μl
	total 50 μl

37°Cで20時間静置した

９月６日

Member

横井川

1日に確認したDIAP2をフェノールクロロホルム処理し、下表に従って制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)

DIAP2

PCR産物 in ddH2O	44 μl
10 x M Buffer	5 μl
XbaⅠ	1 μl
	total 50 μl

37°Cで20時間静置した。

９月７日

Member

横井川

[http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx QIAquick Gel Extraction Kit]を使用してゲルからDIAP2のDNAを抽出した。

Results

バンドが確認できなかったためゲル抽出を行う事が出来なかった。

９月１２日

Member

松浪、横井川

DIAP2について以下のプライマーを用いて、以下の条件でPCRを行った。

F primer GCTTCTCGATTGACGGAGCTGGGCATGGAGCT

Tm値　　　　62 °C

R primer GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA

Tm値　　　　66.4°C

増幅サイズ　　約1514 bp

PCR条件 10 µM Primer F 1.5 µl 10 µM Primer R 1.5 µl Template DNA 1 µl 10 x PCR Buffer 5 µl dNTPs 5 µl MgSO4 2 µl ddH2O 33 µl KOD+ polymelase 1 µl   total 50 µl

Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min   Denature 94°C 15sec 35 Cycle Anneling 50.5°C 30sec Extension 68°C 1min40sec End 4°C keep

９月１３日

Member

松浪、横井川

12日のPCR産物が増幅しているか確かめるため、アガロース電気泳動を行った。
Results

泳動後の写真

左から順に1レーン；マーカー（1 Kbp）、2・3レーン；DIAP2

期待される場所にバンドが見られた。

９月１４日

Member

松浪、横井川

API2-MALT1について以下のプライマーを用いて、以下の条件でPCRを行った。

F primer GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT

Tm値　　　　57.8 °C

R primer GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA

Tm値　　　　56.5 °C

増幅サイズ　　約3131 bp

PCR条件 10 µM Primer F 0.4 µl 10 µM Primer R 0.4 µl Template DNA 1 µl 10 x Ex Taq Buffer 2 µl Takara Ex Taq 0.1 µl 2.0 mM dNTPs 2 µl ddH2O 14.1 µl   total 20 µl

Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min   Denature 94°C 30sec 37 Cycle Anneling 51.5°C 30sec Extension 72°C 3min20sec +Extension 72°C 10min   End 4°C keep

PCR産物が増幅していることを確認するため、アガロース電気泳動を行った。
Results

泳動後の写真

マーカー（1 Kbp）のみバンドが見られた。