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Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF8J
From 2011.igem.org
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:2.BBa_E0240からATG GFPを作るためのプライマー設計<br> | :2.BBa_E0240からATG GFPを作るためのプライマー設計<br> | ||
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:1.全てのサンプルに大腸菌の増殖がみられた。 | :1.全てのサンプルに大腸菌の増殖がみられた。 | ||
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::Tm値:67.75°C 33塩基<br> | ::Tm値:67.75°C 33塩基<br> | ||
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::R: 5' AAA<font color="#ff0000">CTGCAG</font>AAA<font color="#ff0000">ACTAGT</font>TTTTTATTATTTGTATAG<br> | ::R: 5' AAA<font color="#ff0000">CTGCAG</font>AAA<font color="#ff0000">ACTAGT</font>TTTTTATTATTTGTATAG<br> | ||
| - | + | <em>Pst</em>Ⅰ <em>Spe</em>Ⅰ<br> | |
::Tm値:67.66°C 36塩基 | ::Tm値:67.66°C 36塩基 | ||
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:2.小さいが、コロニーが生えていた。念のために、翌日再度トランスフォーメーションをする。 | :2.小さいが、コロニーが生えていた。念のために、翌日再度トランスフォーメーションをする。 | ||
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:吉村 | :吉村 | ||
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:pSB1C3のトランスフォーメーション | :pSB1C3のトランスフォーメーション | ||
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<b>Results</b> | <b>Results</b> | ||
:小さいコロニーの生育がみられた。 | :小さいコロニーの生育がみられた。 | ||
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:吉村、中川 | :吉村、中川 | ||
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:pSB1C3のプレカルチャー(6サンプル) | :pSB1C3のプレカルチャー(6サンプル) | ||
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:6サンプルのうち3サンプルは培養に成功した。 | :6サンプルのうち3サンプルは培養に成功した。 | ||
:3サンプルはコンタミの可能性があるため、念を入れて翌日もプレカルチャーを行うことにした。 | :3サンプルはコンタミの可能性があるため、念を入れて翌日もプレカルチャーを行うことにした。 | ||
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==''８月３０日''== | ==''８月３０日''== | ||
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:中川<br> | :中川<br> | ||
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:1.pSB1C3のプレカルチャー(6サンプル) | :1.pSB1C3のプレカルチャー(6サンプル) | ||
:2.プライマーの再設計 | :2.プライマーの再設計 | ||
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:1.コンタミすることなく培養に成功した。 | :1.コンタミすることなく培養に成功した。 | ||
:2.以下のように設計した。 | :2.以下のように設計した。 | ||
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| - | + | <em>Eco</em>RⅠ <em>Xba</em>Ⅰ<br> | |
::Tm値:68.8゜C 35塩基<br> | ::Tm値:68.8゜C 35塩基<br> | ||
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==''８月３１日''== | ==''８月３１日''== | ||
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:中川<br> | :中川<br> | ||
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| - | + | :pSB1C3のアルカリミニプレップ、フェノールクロロホルム処理をした後、下表に従って、30分37℃で制限酵素処理を行った。 | |
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| - | 制限酵素処理後、100 V 30minで電気泳動を行った。 | + | :制限酵素処理後、100 V 30minで電気泳動を行った。 |
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<b>Results</b> | <b>Results</b> | ||
Latest revision as of 10:38, 4 October 2011
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| Home | Team | Project | Parts | Notebook | Safety | Human Practice | Attributions |
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| Home > Notebook > Lab Note > August | Language：English/Japanese |
|---|
８月２２日
Member
- 吉村、中川、松浪
- BBa_E0240のトランスフォーメーションをした。
Results
- コロニーの生育がみられた。
８月２３日
Member
- 吉村、中川
- 1.BBa_E0240のプレカルチャー
- 2.BBa_E0240からATG GFPを作るためのプライマー設計
Results
- 1.全てのサンプルに大腸菌の増殖がみられた。
- 2.以下のように設計した。
- F: 3' TTGAATTCTTTCTAGATTCGTAAAGGAGAAGAA
- F: 3' TTGAATTCTTTCTAGATTCGTAAAGGAGAAGAA
EcoRⅠ XbaⅠ
- Tm値:67.75°C 33塩基
- Tm値:67.75°C 33塩基
- R: 5' AAACTGCAGAAAACTAGTTTTTTATTATTTGTATAG
- R: 5' AAACTGCAGAAAACTAGTTTTTTATTATTTGTATAG
PstⅠ SpeⅠ
- Tm値:67.66°C 36塩基
８月２４日
Member
- 吉村、中川
- BBa_E0240のアルカリミニプレップをした後、下表に従って、30分37℃で制限酵素処理を行った。
ddH2O 2 µl BBa_E0240 50 µl EcoRⅠ 1 µl PstⅠ 1 µl 10 x H Buffer 6 µl total 60 µl
- 制限酵素処理後、100 V 30minでアガロース電気泳動行った。
Results
- 泳動後の写真
-
- 800bpあたりにバンドが出ていた。
８月２５日
Member
- 吉村、中川
- 23日に作製したプライマーを用いて、以下の条件でPCRを行った。
PCR条件 10 µM GFP Primer F 1.5 µl 10 µM GFP Primer R 1.5 µl BBa_E0240 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 4 µl ddH2O 32 µl KOD Plus 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 95°C 30sec Denature 95°C 30sec 30 Cycle Anneling 50°C 1min Extension 68°C 1min End 4°C keep
- PCR産物が増幅していることを確認するため、アガロース電気泳動を行った。
- PCR産物の増幅を確認した後、下表に従ってPCR産物の制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)
ddH2O 2 µl BBa_E0240 50 µl EcoRⅠ 1 µl PstⅠ 1 µl 10 x H Buffer 6 µl total 60 µl
Results
- 泳動後の写真
-
- 800bpあたりにバンドが見られ、PCR産物の増幅が確認できた。
８月２６日
Member
- 中川
- 1.ゲルからのDNA抽出
- 2.pSB1C3のトランスフォーメーション
Results
- 1.ゲル切り出し後の写真
-
- 濃度は510 ng/µlだった。
- 2.小さいが、コロニーが生えていた。念のために、翌日再度トランスフォーメーションをする。
８月２７日
Member
- 吉村
- pSB1C3のトランスフォーメーション
Results
- 小さいコロニーの生育がみられた。
８月２９日
Member
- 吉村、中川
- pSB1C3のプレカルチャー(6サンプル)
Results
- 6サンプルのうち3サンプルは培養に成功した。
- 3サンプルはコンタミの可能性があるため、念を入れて翌日もプレカルチャーを行うことにした。
８月３０日
Member
- 中川
- 1.pSB1C3のプレカルチャー(6サンプル)
- 2.プライマーの再設計
Results
- 1.コンタミすることなく培養に成功した。
- 2.以下のように設計した。
- F: 3' TTGAATTCTTTTCTAGATTTCGTAAAGGAGAAGAA
- F: 3' TTGAATTCTTTTCTAGATTTCGTAAAGGAGAAGAA
EcoRⅠ XbaⅠ
- Tm値:68.8゜C 35塩基
- Tm値:68.8゜C 35塩基
８月３１日
Member
- 中川
- pSB1C3のアルカリミニプレップ、フェノールクロロホルム処理をした後、下表に従って、30分37℃で制限酵素処理を行った。
ddH2O 2 µl BBa_E0240 50 µl EcoRⅠ 1 µl PstⅠ 1 µl 10 x H Buffer 6 µl total 60 µl
- 制限酵素処理後、100 V 30minで電気泳動を行った。
Results
- 泳動後の写真
-
