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Team:KIT-Kyoto/れおぽん実験
From 2011.igem.org
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【実験方法】<br> | 【実験方法】<br> | ||
| - | <span style="WIDOWS: 2; TEXT-TRANSFORM: none; BACKGROUND-COLOR: rgb(255,255,255); TEXT-INDENT: 0px; LETTER-SPACING: normal; FONT: 13px/19px sans-serif; WHITE-SPACE: normal; ORPHANS: 2; COLOR: rgb(0,0,0); WORD-SPACING: 0px; -webkit-text-decorations-in-effect: none; -webkit-text-size-adjust: auto; -webkit-text-stroke-width: 0px" class=Apple-style-span> | + | <span style="WIDOWS: 2; TEXT-TRANSFORM: none; BACKGROUND-COLOR: rgb(255,255,255); TEXT-INDENT: 0px; LETTER-SPACING: normal; FONT: 13px/19px sans-serif; WHITE-SPACE: normal; ORPHANS: 2; COLOR: rgb(0,0,0); WORD-SPACING: 0px; -webkit-text-decorations-in-effect: none; -webkit-text-size-adjust: auto; -webkit-text-stroke-width: 0px" class=Apple-style-span>↓前日のプレカルチャーで培養した培養液を1.5 mlチューブにうつし、15,000 rpm、4 ℃で5分間遠心し、上清を捨てた<br> |
| - | ℃で5分間遠心し、上清を捨てた<br> | + | |
↓100 μlの氷冷したSolution Iを加え、ボルテックスした<br> | ↓100 μlの氷冷したSolution Iを加え、ボルテックスした<br> | ||
| - | ↓沈殿物を溶かした後、200 | + | ↓沈殿物を溶かした後、200 μlのSolution IIを加え、混ぜた<br> |
| - | μlのSolution IIを加え、混ぜた<br> | + | |
↓氷上で5分間冷やした<br> | ↓氷上で5分間冷やした<br> | ||
| - | ↓150 μlのSolution | + | ↓150 μlのSolution IIIを加え、混ぜた<br> |
| - | IIIを加え、混ぜた<br> | + | |
↓氷上で5分間冷やした<br> | ↓氷上で5分間冷やした<br> | ||
| - | ↓15,000 rpm、4 | + | ↓15,000 rpm、4 ℃で10分間遠心した<br> |
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↓上清を新しいチューブにとり、沈殿物は廃棄した<br> | ↓上清を新しいチューブにとり、沈殿物は廃棄した<br> | ||
| - | ↓450 | + | ↓450 μlのイソプロパノールを加え、混ぜた<br> |
| - | μlのイソプロパノールを加え、混ぜた<br> | + | |
↓2分間室温で放置した<br> | ↓2分間室温で放置した<br> | ||
↓15,000 rpm、室温で10分間遠心し、上清を捨てた<br> | ↓15,000 rpm、室温で10分間遠心し、上清を捨てた<br> | ||
| - | ↓150～200 | + | ↓150～200 μlの70%エタノールを加え、軽くボルテックスした<br> |
| - | μlの70%エタノールを加え、軽くボルテックスした<br> | + | |
↓2分間室温で放置した<br> | ↓2分間室温で放置した<br> | ||
| - | ↓15,000 | + | ↓15,000 rpm、室温で10分間遠心し、上清を捨てた<br> |
| - | rpm、室温で10分間遠心し、上清を捨てた<br> | + | |
↓沈殿を10分～15分乾かした<br> | ↓沈殿を10分～15分乾かした<br> | ||
| - | ↓RNaseのはいったTEを20 μl加えて37 | + | ↓RNaseのはいったTEを20 μl加えて37 ℃で培養した</span></font> |
| - | ℃で培養した</span></font> | + | |
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Revision as of 02:26, 18 September 2011
８/22(月)
吉村、中川、松浪
BBa_E0240(GFP+pSB1A2)のトランスフォーメーション
【目的】
BBa_E0240(GFP+pSB1A2)の増殖
【実験方法】
氷上でコンピテント細胞(DH5
Alpha:大腸菌株)を解凍した。
↓前もって冷やしておいた1.5 mLチューブに100
µLのコンピテント細胞を分注した。
↓BBa_E0240をチューブに1
µL加え、氷上で30分間冷やした。
↓42℃で45秒間熱ショックを与えた。
↓1 mLをLBプレート(+amp)にまいた。
37℃で一晩インキュベートした。
【結果】
コロニーの生育がみられた。
8/23(火)
吉村、中川
BBa_E0240(GFP+pSB1A2)のプレカルチャー
【目的】
BBa_E0240(GFP+pSB1A2)の増殖
【実験方法】
LB/amp 液体培地(50µg/mL)2 mLで6サンプルを37℃、●●rpmで一晩、振とう培養した。
【結果】
全てのサンプルに大腸菌の増殖がみられた。
開始コドンなしのGFPのプライマー設計
【目的】
BBa_E0240(GFP+pSB1A2)から開始コドンなしのGFPを単離・増殖する。
【実験方法】
BBa_E0240(GFP+pSB1A2)から開始コドンなしのGFPの上流にEcoRⅠ、XbaⅠの制限酵素サイト、下流にSpeⅠ、Pst
Ⅰの制限酵素サイトがあるようにプライマー設計をした。
【結果】
以下のようにプライマーを設計した。
F: 3' TTGAATTCTTTCTAGATT
CGTAAAGGAGAAGAA
Tm値 67.75℃ 33塩基
R: 5' AAACTGCAGAAAACTAGTTTTTTATTATTTGTATAG
Tm値 67.66℃ 36塩基
8/24(水) 11:00～
吉村、中川
BBa_E0240のアルカリミニプレップ
【目的】
形質転換した大腸菌からBBa_E0240のプラスミドDNAを回収、精製する。
【実験方法】
↓前日のプレカルチャーで培養した培養液を1.5 mlチューブにうつし、15,000 rpm、4 ℃で5分間遠心し、上清を捨てた
↓100 μlの氷冷したSolution Iを加え、ボルテックスした
↓沈殿物を溶かした後、200 μlのSolution IIを加え、混ぜた
↓氷上で5分間冷やした
↓150 μlのSolution IIIを加え、混ぜた
↓氷上で5分間冷やした
↓15,000 rpm、4 ℃で10分間遠心した
↓上清を新しいチューブにとり、沈殿物は廃棄した
↓450 μlのイソプロパノールを加え、混ぜた
↓2分間室温で放置した
↓15,000 rpm、室温で10分間遠心し、上清を捨てた
↓150～200 μlの70%エタノールを加え、軽くボルテックスした
↓2分間室温で放置した
↓15,000 rpm、室温で10分間遠心し、上清を捨てた
↓沈殿を10分～15分乾かした
↓RNaseのはいったTEを20 μl加えて37 ℃で培養した
