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Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF8J
From 2011.igem.org
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| + | 以下の条件でPCRを行った。 | ||
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| + | :<tr><td width="150px" align=center>10 µM GFP Primer F</td><td width="100px" align=right>1.5 µl</td></tr> | ||
| + | :<tr><td align=center>10 µM GFP Primer R</td><td align=right>1.5 µl</td></tr> | ||
| + | :<tr><td align=center>BBa_E0240</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
| + | :<tr><td align=center>10 x PCR Buffer for KOD Plus</td><td align=right>5 µl</td></tr> | ||
| + | :<tr><td align=center>dNTPs</td><td align=right>4 µl</td></tr> | ||
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| + | :<tr><td align=center>KOD Plus</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
| + | :<tr><td> </td><td align=right>total 50 µl</td></tr> | ||
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| + | :</td><TD></TD><TD></TD><td> | ||
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| + | :<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr> | ||
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| + | :<table border=1 width="300px"> | ||
| + | :<tr><td width="100px" align=center>Start</td><td width="200px" align=right>95°C、30秒</td></tr> | ||
| + | :<tr><td align=center rowspan=3>Cycle x 30</td><td align=right>95°C、30秒(熱変性)</td></tr> | ||
| + | :<tr><td align=right>50°C、1分(アニーリング)</td></tr> | ||
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| + | :<tr><td align=center>End</td><td align=right>4°Cで保持</td></tr> | ||
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Revision as of 13:08, 3 October 2011
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| Home | Team | Project | Parts | Notebook | Safety | Human Practice | Attributions |
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| Home > Notebook > Lab Note > August | Language：English/Japanese |
|---|
８月２２日
Member
- 吉村、中川、松浪
Purpose
- BBa_E0240のトランスフォーメーション
Results
- コロニーの生育がみられた。
８月２３日
Member
- 吉村、中川
Purpose
- 1.BBa_E0240のプレカルチャー
- 2.BBa_E0240からATG GFPを作るためのプライマー設計
Results
- 1.全てのサンプルに大腸菌の増殖がみられた。
- 2.以下のように設計した。
- F: 3' TTGAATTCTTTCTAGATTCGTAAAGGAGAAGAA
- F: 3' TTGAATTCTTTCTAGATTCGTAAAGGAGAAGAA
EcoRⅠ XbaⅠ
- Tm値:67.75゜C 33塩基
- Tm値:67.75゜C 33塩基
- R: 5' AAACTGCAGAAAACTAGTTTTTTATTATTTGTATAG
- R: 5' AAACTGCAGAAAACTAGTTTTTTATTATTTGTATAG
PstⅠ SpeⅠ
- Tm値:67.66゜C 36塩基
８月２４日
Member
吉村、中川
Purpose
- BBa_E0240のアルカリミニプレップ
- BBa_E0240の電気泳動
Method
- BBa_E0240のアルカリミニプレップをした後、下表に従って、30分37℃で制限酵素処理を行った。
ddH2O 2 µl BBa_E0240 50 µl EcoRⅠ 1 µl PstⅠ 1 µl 10 x H Buffer 6 µl total 60 µl
- 制限酵素処理後、100 V 30minで電気泳動した。
Results
- 泳動後の写真
-
- 800bpあたりにバンドが出ていた。
８月２５日
Member
吉村、中川
Purpose
- PCR(23日に作製したプライマーを用いた)
- アガロース電気泳動(PCR産物の増幅確認)
Method
以下の条件でPCRを行った。
PCR条件 10 µM GFP Primer F 1.5 µl 10 µM GFP Primer R 1.5 µl BBa_E0240 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 4 µl ddH2O 32 µl KOD Plus 1 µl total 50 µl Cycle条件 Start 95°C、30秒 Cycle x 30 95°C、30秒(熱変性) 50°C、1分(アニーリング) 68°C、1kb/分(伸長) End 4°Cで保持
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