Team:KIT-Kyoto/matsunami

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Revision as of 15:58, 24 August 2011

あいうえお

さささ	ささｓｓｓ	あああああ
Ｔ_Ｅ	5^0μＬ	1000

8月8日（月）

松浪、横井川

【目的】
　cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】
　（1）PCR反応液の調製
       <1本分あたり>
　　　Takara Ex Taq　　　　　　　　　　0.1 µL
       10 x Ex Taq Buffer　                2 µL　　　　　　
       dNTP(2.0 µM)                         2 µL
       F primer                              0.4 µL
       R primer                              0.4 µL
       Templet DNA                          1 µL
       milliQ                                 14.1 µL

       上記の分量を混合した。
　　　
　　　＊<プライマーの塩基配列>
　　　　　①DIAP2
              F primer  :                                                             Tm値
                 GCTTCTCGAGACGGAGCTGGGCATGGAGCT　　　　　69 ℃
　　　　　　 R primer :
                 GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA           66.4 ℃
　　　　　　増幅サイズ　　約1514 bp

           ②API2-MALT1
              F primer  :                                                             Tm値
                 GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT            57.8 ℃
              R primer
                 GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA              56.5 ℃
              増幅サイズ　　約3131 bp
　　　

　 (2)PCR反応条件
　　　<1>×1　　　Pre-denature 　 94 ℃　　　2 min

       <2>×37　　Denature        　 94 ℃　　 15 sec

                       (DIAP2)
                       Annealing        56.9 ℃　　   30 sec
                       Extension          72 ℃       1 min 40 sec
                       (API2-MALT1)
                       Annealing        51.5 ℃　　   30 sec
                       Extension          72 ℃       3 min 20 sec

        上記の条件でPCRを行った。

8月9日（火）

松浪、横井川

【目的】
　PCR産物の確認

【実験操作】
  PCR反応液　　　    2 µL
milliQ                    8 µL
6 x loading dye       2 µL
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30分の条件で電気泳動した。
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。

【目的】
　pUAST溶液の形質転換

【実験操作】
　pUAST　1 µLとコンピテントセルを混合した。これを氷上で15分間放置し、43℃で30秒間温め、さらに氷上で10分間放置した。
　これをLBプレートに塗り37℃でincubateした。

8月10日（水）

松浪

【目的】
　cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】
　8月8日と同様である。

【目的】
　大腸菌の培養

【実験操作】
　①ガスバーナーで加熱滅菌したつまようじでLB（amp+）プレートから生えてきた大腸菌のコロニーをついた。
　②ついた先端を2個のLB培地（amp+）2mLに攪拌した。
　③pUASTとコンピテントセルの混合物を10 µL、100 µLをそれぞれまいた。

8月11日（木）

松浪

【目的】
　pUAST flag vectorの大量精製

【実験操作】
　①培養液1.5 mLを、15000rpm、5分、4℃の条件で遠心した。この間にglucose solution、5M K-acetate pH 4.8を氷上で冷やした。
　②5分後、上清を廃棄しglucose solution　100 µL加えて攪拌した。
　③沈殿物を溶解した後、0.2N NaOH 1% SDS 200 µLを加えてよく混ぜ、氷上に5分間放置した。
　④5分後、5M K-acetate pH 4.8 150 µLを加えてよく混ぜ、氷上に5分間放置した。
　⑤5分後、15000rpm、10分、4℃の条件で遠心した。
　⑥上清を新しいチューブに移し、isopropanolを等量入れ攪拌し3分間静置した。
　⑦3分後、15000rpm、10分、25℃の条件で遠心した。
　⑧遠心後、上清を廃棄し70% EtOH 200 µLを加えて軽く攪拌し3分間静置した。その後、15000rpm、10分、25℃の条件で再び遠心した。
　⑨遠心後、上清を廃棄し乾燥させてRnase in TE 20 µLを加えた。
　
　この溶液とPCR産物を電気泳動した。
　操作は8月9日と同様である。

8月12日（金）

松浪、横井川

【目的】
　pUAST flag vectorの大量精製

【実験操作】
　①培養した大腸菌をオートクレーブした遠心管で4000G、10分、25℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。
　②R3 with RNase A4 を4 mL加えて、攪拌し完全に溶解させた。
　③L7を4 mLを加え丁寧に混合し5分間室温で静置した。
　④5分後、N3を4 mL加えてすぐに混ぜた。これを12000G、10分、25℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。
　⑤事前にEQ1 10 mLを加えて平衡化していたカラムに上清をLoadし、上清が流れ落ちるのを待った。このとき、一部をチューブに保存した。
　⑥Wash Buffer (W8) 10 mLを加えて洗浄した。これを2回行った。
　⑦Elution buffer (E4)を5 mL加えてDNAを溶出させた。追加で、E4 2 mLをLoadし、別のチューブに保存した。
　⑧isopropanol 3.5 mLを加えて混合し、これを15000G、40分、4℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。
　⑨70%　EtOH 3mLを加えて再懸濁し、15000G、5分、4℃の条件で再び遠心し、遠心後上清を捨てた。
　⑩Air-dryで乾燥させ200 µLでのTEに溶かした。

　次にこの溶液のDNA濃度測定を行った。
　①milliQ 100 µLおよび、精製したDNA溶液を100倍希釈した溶液を準備した。
　②milliQ 100 µLでゼロ補正を行い、サンプル1、5の吸光度を測定した。結果を以下に示す（表1）。
　　　　　　　　　　　　　　　　表1、サンプル1、5の吸光度の値
　
　サンプル1

　0.189

　0.208

0.192　

0.190　

0.191　

平均は0.194であった。
これより、サンプル1のDNA濃度は0.970 µg/µLであった。

サンプル5

　0.282

0.276　

0.278　

0.269　

平均は0.275でった。
これより、サンプル5のDNA濃度は1.37 µg/µLであった。

　次にこれらの溶液について電気泳動を行った。
　　操作は8月9日と同様である。

8月15日（月）

松浪、横井川

【目的】
　cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認

【実験操作】
　8月8日と同じであるが、Annealing について以下のように変更した。
　DIAP2②　　　　  　　　　 56.9℃
　API2-MALT1②　　　　　53℃

　その後、電気泳動を行った。操作は8月9日と同様である。

8月16日（火）

松浪

【目的】
　cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認

【実験操作】
　8月8日と同じであるが、Annealing について以下のように変更した。
　DIAP2②　　　　  　　　　　　 58.9℃
　API2-MALT1①、③　　　　　53℃

　その後、電気泳動を行った。操作は8月9日と同様である。

8月17日（水）

松浪、横井川

【目的】
　cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認

【実験操作】
　8月8日と同じであるが、Annealing について以下のように変更した。
　DIAP2②　　　　  　　　　　　 50.5℃
　API2-MALT1③、④　　　　　53.5℃

　その後、電気泳動を行った。操作は8月9日と同様である。

　

　　　

@@ Line 44: / Line 44: @@
 </table>
 </font></p>
+</body>
+</html>
+<html>
+<head>
+<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
+<title></title>
+</head>
+<body>
+<p>8月8日（月）<br>
+<br>
+松浪、横井川<br>
+<br>
+【目的】<br>
+　cDNA
+vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+　（1）PCR反応液の調製<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&lt;1本分あたり&gt;<br>
+　　　Takara&nbsp;Ex&nbsp;Taq　　　　　　　　　　0.1
+&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+x Ex Taq Buffer　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L　　　　　　<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+dNTP(2.0 &micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;F
+primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.4
+&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+R primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.4
+&micro;L&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Templet
+DNA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;14.1
+&micro;L<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+上記の分量を混合した。<br>
+　　　<br>
+　　　＊&lt;プライマーの塩基配列&gt;<br>
+　　　　　①DIAP2<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+F
+primer&nbsp;&nbsp;:&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Tm値<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+GCTTCTCGAGACGGAGCTGGGCATGGAGCT　　　　　69
+℃<br>
+　　　　　　 R primer&nbsp;
+:<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.4
+℃<br>
+　　　　　　増幅サイズ　　約1514
+bp<br>
+<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+②API2-MALT1<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+F
+primer&nbsp;&nbsp;:&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Tm値<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.8
+℃<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+R
+primer<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.5
+℃<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+増幅サイズ　　約3131
+bp<br>
+　　　&nbsp;<br>
+&nbsp;<br>
+(2)PCR反応条件<br>
+　　　&lt;1&gt;×1　　　Pre-denature&nbsp;
+℃　　　2
+min<br>
+<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&lt;2&gt;×37　　Denature&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+℃　　&nbsp; 15
+sec<br>
+<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+(DIAP2)<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.9
+℃　　&nbsp;&nbsp; 30
+sec<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 72
+℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+min
+sec<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+(API2-MALT1)<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.5
+℃　　&nbsp;&nbsp;
+sec<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 72
+℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+min&nbsp;
+sec<br>
+<br>
+<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+上記の条件でPCRを行った。<br>
+<br>
+<br>
+<br>
+月9日（火）<br>
+<br>
+松浪、横井川<br>
+<br>
+【目的】<br>
+　PCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2 &micro;L<br>
+&nbsp;
+milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L<br>
+&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2
+&micro;L<br>
+&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100
+V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+<br>
+<br>
+【目的】<br>
+　pUAST溶液の形質転換<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+　pUAST　1&nbsp;&micro;Lとコンピテントセルを混合した。これを氷上で15分間放置し、43℃で30秒間温め、さらに氷上で10分間放置した。<br>
+　これをLBプレートに塗り37℃でincubateした。<br>
+<br>
+<br>
+<br>
+月10日（水）<br>
+<br>
+松浪<br>
+<br>
+【目的】<br>
+　cDNA
+vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+月8日と同様である。<br>
+<br>
+<br>
+【目的】<br>
+　大腸菌の培養<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+　①ガスバーナーで加熱滅菌したつまようじでLB（amp+）プレートから生えてきた大腸菌のコロニーをついた。<br>
+　②ついた先端を2個のLB培地（amp+）2mLに攪拌した。<br>
+　③pUASTとコンピテントセルの混合物を10&nbsp;&micro;L、100
+&micro;Lをそれぞれまいた。<br>
+<br>
+<br>
+月11日（木）<br>
+<br>
+松浪<br>
+<br>
+【目的】<br>
+　pUAST flag
+vectorの大量精製<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+　①培養液1.5 mLを、15000rpm、5分、4℃の条件で遠心した。この間にglucose
+solution、5M K-acetate pH 4.8を氷上で冷やした。<br>
+　②5分後、上清を廃棄しglucose solution　100
+&micro;L加えて攪拌した。<br>
+　③沈殿物を溶解した後、0.2N NaOH 1% SDS 200
+&micro;Lを加えてよく混ぜ、氷上に5分間放置した。<br>
+　④5分後、5M K-acetate pH 4.8 150
+&micro;Lを加えてよく混ぜ、氷上に5分間放置した。<br>
+　⑤5分後、15000rpm、10分、4℃の条件で遠心した。<br>
+　⑥上清を新しいチューブに移し、isopropanolを等量入れ攪拌し3分間静置した。<br>
+　⑦3分後、15000rpm、10分、25℃の条件で遠心した。<br>
+　⑧遠心後、上清を廃棄し70%
+EtOH 200
+&micro;Lを加えて軽く攪拌し3分間静置した。その後、15000rpm、10分、25℃の条件で再び遠心した。<br>
+　⑨遠心後、上清を廃棄し乾燥させてRnase in
+TE 20
+&micro;Lを加えた。<br>
+　<br>
+　この溶液とPCR産物を電気泳動した。<br>
+　操作は8月9日と同様である。<br>
+<br>
+<br>
+<br>
+月12日（金）<br>
+<br>
+松浪、横井川<br>
+<br>
+【目的】<br>
+　pUAST
+flag
+vectorの大量精製<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+　①培養した大腸菌をオートクレーブした遠心管で4000G、10分、25℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+　②R3
+with RNase A4 を4 mL加えて、攪拌し完全に溶解させた。<br>
+　③L7を4
+mLを加え丁寧に混合し5分間室温で静置した。<br>
+　④5分後、N3を4
+mL加えてすぐに混ぜた。これを12000G、10分、25℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+　⑤事前にEQ1 10
+mLを加えて平衡化していたカラムに上清をLoadし、上清が流れ落ちるのを待った。このとき、一部をチューブに保存した。<br>
+　⑥Wash Buffer (W8)
+mLを加えて洗浄した。これを2回行った。<br>
+　⑦Elution buffer (E4)を5 mL加えてDNAを溶出させた。追加で、E4 2
+mLをLoadし、別のチューブに保存した。<br>
+　⑧isopropanol 3.5
+mLを加えて混合し、これを15000G、40分、4℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+　⑨70%　EtOH
+mLを加えて再懸濁し、15000G、5分、4℃の条件で再び遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+　⑩Air-dryで乾燥させ200
+&micro;LでのTEに溶かした。<br>
+<br>
+　次にこの溶液のDNA濃度測定を行った。<br>
+　①milliQ 100
+&micro;Lおよび、精製したDNA溶液を100倍希釈した溶液を準備した。<br>
+　②milliQ 100
+&micro;Lでゼロ補正を行い、サンプル1、5の吸光度を測定した。結果を以下に示す（表1）。<br>
+　　　　　　　　　　　　　　　　表1、サンプル1、5の吸光度の値<br>
+　<br>
+　サンプル1<br>
+<table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" width="75%">
+  <tr>
+    <td>　0.189</td>
+    <td>　0.208</td>
+    <td>0.192　</td>
+    <td>0.190　</td>
+    <td>0.191　</td>
+  </tr>
+</table>平均は0.194であった。<br>
+これより、サンプル1のDNA濃度は0.970
+&micro;g/&micro;Lであった。<br>
+<br>
+サンプル5<br>
+<table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" width="75%">
+  <tr>
+    <td>　0.282</td>
+    <td>0.276　</td>
+    <td>0.278　</td>
+    <td>0.269　</td>
+    <td>0.269　</td>
+  </tr>
+</table>平均は0.275でった。<br>
+これより、サンプル5のDNA濃度は1.37
+&micro;g/&micro;Lであった。<br>
+<br>
+　次にこれらの溶液について電気泳動を行った。<br>
+　　操作は8月9日と同様である。<br>
+<br>
+<br>
+月15日（月）<br>
+<br>
+松浪、横井川<br>
+<br>
+【目的】<br>
+　cDNA
+vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+月8日と同じであるが、Annealing&nbsp;について以下のように変更した。<br>
+　DIAP2②　　　　&nbsp;&nbsp;
+.9℃<br>
+　API2-MALT1②　　　　　53℃<br>
+<br>
+　その後、電気泳動を行った。操作は8月9日と同様である。<br>
+<br>
+<br>
+月16日（火）<br>
+<br>
+松浪<br>
+<br>
+【目的】<br>
+　cDNA
+vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+月8日と同じであるが、Annealing&nbsp;について以下のように変更した。<br>
+　DIAP2②　　　　&nbsp;&nbsp;
+.9℃<br>
+　API2-MALT1①、③　　　　　53℃<br>
+<br>
+　その後、電気泳動を行った。操作は8月9日と同様である。<br>
+<br>
+<br>
+月17日（水）<br>
+<br>
+松浪、横井川<br>
+<br>
+<br>
+【目的】<br>
+　cDNA
+vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+月8日と同じであるが、Annealing&nbsp;について以下のように変更した。<br>
+　DIAP2②　　　　&nbsp;&nbsp;
+.5℃<br>
+　API2-MALT1③、④　　　　　53.5℃<br>
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+　その後、電気泳動を行った。操作は8月9日と同様である。<br>
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 </body>
 </html>