Team:Lyon-INSA-ENS/Realisation/Protocols/LigationFr

Ligation

Ce protocole permet de liguer des plasmides par leurs sites de restriction compatibles, précédemment coupés. Les volumes d'ADN sont donnés pour des concentrations similaires pour l'insert et le vecteur et doivent être adaptés si ces concentrations sont trop différentes. L'enzyme ligase et le tampon T4 DNA ligase ont été fournis par Fermentas.

Procédure

1. Ligation standard Dans un tube Eppendorf, ajouter les solutions suivantes:
- 6 µL d'insert
- 4 µL de vecteur
- 2 µL de tampon T4 DNA ligase
- 6 µL d'eau

Or 1. Ligation 3A Dans un tube Eppendorf, ajouter les solutions suivantes:
- 2 µL de chaque solution d'ADN
- 2 µL de tampon T4 DNA ligase
- 10 µL d'eau

2. Ajouter 2µL de ligase.

3. Incuber à température ambiante pendant 3h.

4. Incuber à 70°C pendant 5 min afin d'inactiver la ligase.