Team:Lyon-INSA-ENS/Realisation/Protocols/LigationFr

Ligation

Ce protocole permet de liguer des plasmides par leurs sites de restriction compatibles, précédemment coupés. Les volumes d'ADN sont donnés pour des concentrations similaires pour l'insert et le vecteur et doivent être adaptés si ces concentrations sont trop différentes. Les enzymes et tampons ont été fournis par Fermentas.

Procedure

1. Standard ligation In an eppendorf tube, add the following solutions :
- 6 µL insert
- 4 µL vector
- 2 µL T4 DNA ligase buffer
- 6 µL water

Or 1. 3A ligation In an eppendorf tube, add the following solutions :
- 2 µL of each DNA solution
- 2 µL T4 DNA ligase buffer
- 10 µL water

2. Add 2µL of ligase.

3. Incubate at room temperature for 3h

4. Incubate at 70°C for 5 mn to inactivate the ligase.