Team:Lyon-INSA-ENS/Realisation/Protocols/FermentasFr

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Digestion Fermentas

Ce protocole permet de couper les plasmides au niveau de sites de restriction spécifiques, en utilisant des enzymes de restriction.

Procédure

1. Dans un tube Eppendorf, ajouter, dans un ordre quelconque, les solutions suivantes:
-250 ng d'ADN ( si la concentration est inconnue, utiliser 5µL )
-2.5µL (1X) ou 5µL (2X) de tampon "tango" 10X ( la quantité introduite dépend des enzymes utilisées)
-de l'eau pour atteindre un volume total de 25µL après addition des enzymes

2. Ajouter 1µL de chacune des enzymes.

3. Incuber à 37°C pendant 1h30.

4. Incuber à 70°C pendant 10min afin d'inactiver les enzymes de restriction.