rrnB P1, lamda pR, RFP og Lux. Prosedyre gitt i Prosedyrer / Oppskrifter.

Lørdag 25. juni Flyttet plater til kjøleskap.

Søndag 26. juni

De fire Biobrickene (p1, lamda pR, RFP og Lux) ble inokulert i 3mL LB for isolering av plasmid.

Mandag 27. juni

Plasmid ble isolert fra P1, lamda pR, RFP og Lux Biobrickene ved bruk av promega miniprep kit.

Konsentrasjoner:

P1 98,4 ng / µL lambda Pr: 43,8 ng / µL RFP 141,8 ng / µL Lux 62,8 ng / µL

Transformantene med lux/RFP var verken røde eller lysende. Det ble foreslått at dette kunne være pga. mulig ekspresjon av tetR som er repressor for pTet som styrer ekspresjon av RFP/lux. Denne antagelsen ble bekreftet av erfaringer som er gjort av tidligere grupper med samme konstrukt.

Siden tetR sin påvirking på pTet blir inhibert av Tc(tetracyclin) prøvde vi å gro cellene i subletale konsentrasjoner av Tc.

E. coli med plasmid med RFP-konstruktet ble grodd i 0 0,1 0,3 0,6 1,0 1,5 og 100 µg/ml Tc i 3 ml LB.

Måling av fluorescens: Hanne Jørgensen kan ordne dette, dersom vi gror kultur med RFP-uttrykk og uten (blank kontroll). Hun må også bli informert om bølgelengde for exitation (584 nm) og emission (607 nm).

mail : hanne.jorgensen@biotech.ntnu.no

Tirsdag 28 juni

Jon Har Bursdag! Jippi!! Hoi Hoi Hoi!!

Ligering av lambda pR inn i backbone:

· Kutte RFP og RFP + luxI construct med EcoRI og XbaI.

· Kutte lambda pR med EcoRI og SpeI

· Ligate them bitches – win

Kuttet RFP, Lux og Lambda Pr promotor ved bruk av iGem sin protokoll. http://partsregistry.org/Help:Protocols/Restriction_Digest

Alternativ design av system som skal gjøre cellene røde ved tilsats av ppGpp:

Sponsors

---

NTNU Rector's Office Programme for Bioinformatics, NTNU