Team:KIT-Kyoto/ぷろとこる

From 2011.igem.org

(Difference between revisions)

Revision as of 15:04, 25 August 2011

ぷろとこるうｐページ(^ω^)/

LB培地

bacto tryptone	10 g
bacto yeast evtract	5 g
NaCl	10 g

LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れる
↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かす
↓三角フラスコに分注し、アルミ箔で二重にフタをして
121 ℃で20分オートクレーブ滅菌する

LBプレート

LB培地
bacto-agar	15 g/l
アンピシリン	50 µg/ml

LB培地を作製する。
↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌する
↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌する
↓65 ℃程度に冷めたら、アンピシリンを1 mlあたり50 µg加える
↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注する
水平な所に置いて固まらせる

トランスフォーメーション

↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍する
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに100 μlのコンピテント細胞を分注する
↓余ったコンピテント細胞は-80 °Cの冷凍庫に戻す
↓DNAをチューブに1～5 μl加えて、氷上で30分間冷やす
↓42 °Cで45秒間熱ショックを与える
↓0.9 mlのSOC培地を加える
↓37 °Cで1時間、振りながら回復培養する
↓1 mlをLBプレート(+amp,+kan,+camのいずれか)にまく
↓37 °Cで一晩培養する

@@ Line 17: / Line 17: @@
 <tr><td align=center>NaCl</td><td align=right>10 g</td></tr>
 </table>
 <BR>
-LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れる。<BR>
-↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かす。<BR>
+LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れる<BR>
+↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かす<BR>
 ↓三角フラスコに分注し、アルミ箔で二重にフタをして<BR>
-℃で20分オートクレーブ滅菌する。<BR>
+℃で20分オートクレーブ滅菌する<BR>
@@ Line 39: / Line 41: @@
 LB培地を作製する。<BR>
-↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌する。<BR>
+↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌する<BR>
-↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌する。<BR>
+↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌する<BR>
-↓65 ℃程度に冷めたら、アンピシリンを1 mlあたり50 µg加える。<BR>
+↓65 ℃程度に冷めたら、アンピシリンを1 mlあたり50 µg加える<BR>
-↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注する。<BR>
+↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注する<BR>
-水平な所に置いて固まらせる。<BR>
+水平な所に置いて固まらせる<BR>
 <BR><BR><BR>
+<p><strong>トランスフォーメーション</strong></p>
+↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍する<BR>
+↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに100 μlのコンピテント細胞を分注する<BR>
+↓余ったコンピテント細胞は-80 °Cの冷凍庫に戻す<BR>
+↓DNAをチューブに1～5 μl加えて、氷上で30分間冷やす<BR>
+↓42 °Cで45秒間熱ショックを与える<BR>
+↓0.9 mlのSOC培地を加える<BR>
+↓37 °Cで1時間、振りながら回復培養する<BR>
+↓1 mlをLBプレート(+amp,+kan,+camのいずれか)にまく<BR>
+↓37 °Cで一晩培養する<BR>
+<BR><BR><BR>
 </body>
 </html>