Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNote/GFPMLF9J

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９月１日

Member

中川


1.QIAquick Gel Extraction Kitを使用してゲルからpSB1C3のDNAを抽出し、濃度を測定した。
2.8/30に再設計したプライマーを用いて以下の条件でBBa_E0240のPCRを行った。


PCR条件
10 µM GFP Primer F1.5 µl
10 µM GFP Primer R1.5 µl
BBa_E02401 µl
10 x PCR Buffer for KOD Plus5 µl
dNTPs4 µl
MgSO44 µl
ddH2O32 µl
KOD Plus1 µl
 total 50 µl
Cycle条件
Pre-Denature95°C30sec 
Denature95°C30sec30 Cycle
Anneling50°C1min
Extension68°C1min
End4°Ckeep 




Results

1.泳動後の写真

約2kbのところにバンドが見られた。


抽出したゲルのうち5 µlを20倍希釈し、吸光計で濃度測定をしたところ、濃度は17.8ng/µlと算出された。


1回目0.019
2回目0.013
3回目0.019
4回目0.022
5回目0.016
ave.0.0178



2.９月２日に続く


９月２日

Member

中川


昨日のBBa_E0240のPCR産物のフェノールクロロホルム処理、PCR産物の増幅を確認するための電気泳動、PCR産物の制限酵素処理を行った。
制限酵素処理は、下記の表に従って反応液を調整し、37°Cでインキュベートした。(overnight)



Results

泳動後の写真


PCR産物の増幅が確認できた。


９月３日

Member

中川


QIAquick Gel Extraction Kitを使用して制限酵素処理済みのBBa_E0240をゲル抽出した。


Results


９月５日

Member

中川



Results

コロニーは全く生えていなかった。
インサートとベクターの量に注意して再度ライゲーションを行う。


９月６日

Member

吉村、中川



Results

4つのコロニーが確認できた。


９月７日

Member

中川



Results


９月８日

Member

中川



Results


９月９日

Member

中川



Results



９月１２日

Member

吉村、中川



Results

９月１３日

Member

吉村、中川



Results

９月１４日

ベクターのアルカミニプレップ、フェノクロ処理、制限酵素処理

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