Team:KIT-Kyoto/yokoigawa

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8/29(月)

武田、横井川

【目的】
PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理（一回目：Xho I）

【実験操作】
PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）
↓PCR産物を400 µlまでddH₂Oで薄めた
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓3M CH₃COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した
↓上澄みを捨て、乾燥させた
↓ddH₂Oを44 µl加えてvoltexした
※保存する場合 ↓-20°Cで保存した

制限酵素処理(Xho I)
下記の組成に従って反応液を調整した

cDNA

PCR産物 in ddH₂O	44 µl
10 x H Buffer	5 µl
XhoⅠ	1 µl
	total 50 µl

vector

PUAST-flag vector(500 ng/µl)	10 µl
ddH₂O	34 µl
10 x H Buffer	5 µl
XhoⅠ	1 µl
	total 50 µl

37°Cで20時間静置した
8/30(火)
武田、横井川

【目的】
PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理（二回目：Xho I)
【実験操作】
PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）
↓PCR産物を400 µlまでddH₂Oで薄めた
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓3M CH₃COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した
↓上澄みを捨て、乾燥させた
↓ddH₂Oを44 µl加えてvoltexした
※保存する場合 ↓-20°Cで保存する

制限酵素処理(Xba I)

下記の組成に従って反応液を調整する

DIAP2

PCR産物 in ddH₂O	44 µl
10 x M Buffer	5 µl
XbaⅠ	1 µl
	total 50 µl

vector

PUAST-flag vector(500 ng/µl)	10 μl
ddH₂O	34 µl
10 x H Buffer	5 µl
XhoⅠ	1 µl
	total 50 µl

37°Cで20時間静置する
8/31(水)
武田、横井川
【目的】
制限酵素処理したPCR産物・vectorのゲル抽出

【実験操作】
ゲルからのDNA抽出
QIAquick Gel Extraction Kitを使用する
↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくった
↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせた

1 kbpマーカー	5 µl
DIAP2 or PUAST-flag vector	50 µl
Lording Dyi	10 µl

↓50 Vで60分間電気泳動した
↓EtBrでゲルを10分間染色した
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した
↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだした
↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量った
↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 µl)のBuffer QGを加えた
↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かした
↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認した
↓ゲル100 mgに対して、当量(100 µl)の2-プロパノールを加え、混ぜた
↓カラムにサンプルをのせた
↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てた
↓500 µlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かした
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた
↓750 µlのwash Buffer PEをカラムに加えた
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた
↓10,000 rpmで1分間遠心した
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた
↓37 µlのMilliQを加えた
↓10,000 rpmで1分間遠心した
↓そのうち5 µlを20倍希釈し、濃度測定をした

【結果】
pUAST-flag vectorは精製でき、濃度は45.0375 ng/µlであった。
DIAP2はゲル抽出でバンドが見られなかった。

9/1(木)
武田

【目的】
DIAP2のポリメラーゼ連鎖反応

【実験操作】
下記の組成に従って試薬をまぜる
右に示したプログラムで反応を行う

PCR条件

10 µM Primer F	1.5 µl
10 µM Primer R	1.5 µl
Template DNA	1 µl
10 x PCR Buffer	5 µl
dNTPs	5 µl
MgSO₄	2 µl or 4 µl
ddH₂O	33 µl or 31 µl
KOD⁺ polymelase	1 µl
	total 50 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	15sec	35 Cyle
Anneling	50.5°C	30sec
Extension	68°C	100sec
End	4°C	keep

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
ゲル電気泳動

ゲル1枚当たりの組成

SeaKem^RGTG^R-agar	0.2 g
1 x TAE	20 ml

↓上記の組成に従い、試薬を三角フラスコで混ぜてレンジで加熱し、専用容器に入れて固めた
↓制限酵素処理した反応液50 μlに対して6 x loading dye を10 μl加えた
↓サンプルとDNA maker をコーム穴に入れた
↓サンプルをセット後、50 V 60minで電気泳動した
↓電気泳動後、EtBrで10minゲルを染色した
↓染色後、MilliQでゲルを数回洗ってプレートにのせた
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した

9/5(月)
横井川
【目的】
PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理（一回目：Xho I）

【実験操作】
PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）
↓PCR産物を400 µlまでddH₂Oで薄めた
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓3M CH₃COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した
↓上澄みを捨て、乾燥させた
↓ddH₂Oを44 µl加えてvoltexした

制限酵素処理(Xho I)
下記の組成に従って反応液を調整した

cDNA

PCR産物 in ddH₂O	44 μl
10 x H Buffer	5 μl
XhoⅠ	1 μl
	total 50 μl

vector

PUAST-flag vector(500 ng/μl)	10 μl
ddH₂O	34 μl
10 x H Buffer	5 μl
XhoⅠ	1 μl
	total 50 μl

37°Cで20時間静置した

9/6(火)
横井川

【目的】
PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理(二回目：Xba I)

【実験操作】
PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）
↓PCR産物を400 μlまでddH₂Oで薄めた
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 μl加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓3M CH₃COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 μl加えた
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した
↓上澄みを捨て、乾燥させた
↓ddH₂Oを44 µl加えてvoltexした

制限酵素処理(Xba I)
下記の組成に従って反応液を調整した

DIAP2

PCR産物 in ddH₂O	44 μl
10 x M Buffer	5 μl
XbaⅠ	1 μl
	total 50 μl

37°Cで20時間静置した

9/7(水)
横井川
【目的】
制限酵素処理したPCR産物・vectorのゲル抽出

【実験操作】
ゲルからのDNA抽出

QIAquick Gel Extraction Kitを使用する
↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる
↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせる

1 kbp or 100bp マーカー	3 ml
DIAP2	50 ml
Lording Dyi	10 ml

↓50 Vで60分間電気泳動した
↓EtBrでゲルを10分間染色した
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した

【結果】
バンドが確認できなかったためゲル抽出を行う事が出来なかった。

9/17（土)
【目的】
PCR産物の制限酵素処理(二回目：Xba I)

【実験操作】
制限酵素処理(Xba I)
下記の組成に従って反応液を調整した

DIAP2

PCR産物 in ddH₂O	44 μl
10 x M Buffer	5 μl
XbaⅠ	1 μl
	total 50 μl

37°Cで20時間静置した

9/18(日)
横井川
LB培地

bacto tryptone	10 g
bacto yeast evtract	5 g
NaCl	10 g

↓LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れた
↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かした
↓三角フラスコに分注し、アルミ箔で二重にフタをした
↓121°Cで20分オートクレーブ滅菌した

【目的】
制限酵素処理したPCR産物のゲル抽出

【実験操作】
ゲルからのDNA抽出

QIAquick Gel Extraction Kitを使用した
↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくった
↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせた

1 kbp or 100bp マーカー	3 ml
DIAP2	50 ml
Lording Dyi	10 ml

↓50 Vで60分間電気泳動した
↓EtBrでゲルを10分間染色した
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した

【結果】
バンドが確認できなかったためゲル抽出を行う事が出来なかった。

9/20（火）
【目的】
DIAP2のPCR産物の確認

【実験操作】
ゲル電気泳動

ゲル1枚当たりの組成

SeaKem^RGTG^R-agar	0.2 g
1 x TAE	20 ml

↓上記の組成に従い、試薬を三角フラスコで混ぜてレンジで加熱し、専用容器に入れて固める
↓制限酵素処理した反応液50 μlに対して6 x loading dye を10 μl加える
↓サンプルとDNA maker をコーム穴に入れる
↓サンプルをセット後、50 V 60minで電気泳動する
↓電気泳動後、EtBrで10minゲルを染色する
↓染色後、MilliQでゲルを数回洗ってプレートにのせる
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する

【目的】
MLFバンドを切り出し、そのゲル片からDNAを抽出・精製する。

【実験方法】
ゲルからのDNA抽出
QIAquick Gel Extraction Kitを使用する
↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる
↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせる

1 kbp or 100bp マーカー	3 ml
MLF	50 ml
Lording Dyi	7 ml

↓50 Vで60分間電気泳動した
↓EtBrでゲルを40分間染色した
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した
↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだした
↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量った
↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 μl)のBuffer QGを加えた
↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かした
↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認すした
↓ゲル100 mgに対して、当量(100 μl)の2-プロパノールを加え、混ぜた
↓カラムにサンプルをのせた
↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てた
↓500 μlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かした
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた
↓750 μlのwash Buffer PEをカラムに加えた
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた
↓10,000 rpmで1分間遠心した
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた
↓37 μlのMilliQを加えた
↓10,000 rpmで1分間遠心した
↓そのうち5 μlを20倍希釈し、濃度測定をした

【結果】
濃度は70 ng/µlだった。

【目的】
MLFのライゲーション産物の増殖
【実験方法】
トランスフォーメーション
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 μlのコンピテント細胞を分注した
↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した
↓DNAをチューブに3 μl加えて、氷上で30分間冷やした
↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた
↓90 µlのSOC培地を加えた
↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した
↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。
↓37゜Cで一晩インキュベートした。

9/21（水）
LBプレート作成

LB培地
bacto-agar	15 g/l

↓LB培地を作製した
↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌した
↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌した
↓65°C程度に冷めたら、必要であれば抗生物質を加えた
↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注した
↓水平な所に置いて固まらせた

【目的】
pSB1C3 vectorとMLFのライゲーション
【実験方法】

【目的】
MLFのライゲーション産物の増殖
【実験方法】
トランスフォーメーション
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 μlのコンピテント細胞を分注した
↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した
↓DNAをチューブに3 µl加えて、氷上で30分間冷やした
↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた
↓60 µlのSOC培地を加えた
↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した
↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。
↓37゜Cで一晩インキュベートした。

9/22（木）
【目的】
pSB1C3 vectorとMLF、pSB1C3 vectorとGFPのライゲーション

【実験方法】

【目的】
MLFおよびGFPのライゲーション産物の増殖
【実験方法】
トランスフォーメーション
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 μlのコンピテント細胞を分注した
↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した
↓DNAをチューブに3 μl加えて、氷上で30分間冷やした
↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた
↓60 µlのSOC培地を加えた
↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した
↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。
↓37゜Cで一晩インキュベートした。

9/23
ライゲーション
【目的】
MLFおよびGFPのライゲーション
【実験方法】

9/24
プレカルチャー
【目的】 pSB1C3の増殖
【実験方法】

9/25
濃度チェック
【目的】電気泳動によるGFPの濃度測定
【実験方法】

ライゲーション
【目的】 pSB1C3 vectorとGFPのライゲーション
【実験方法】

トランスフォーメーション＜br> 【目的】
pSB1C3 vectorとGFPのライゲーション産物のトランスフォーメーション
【実験方法】
トランスフォーメーション
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 μlのコンピテント細胞を分注した
↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した
↓DNAをチューブに3 μl加えて、氷上で30分間冷やした
↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた
↓60 µlのSOC培地を加えた
↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した
↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。
↓37゜Cで一晩インキュベートした。

@@ Line 249: / Line 249: @@
 ↓15000rpm、4°Cで5min遠心した<br>
 ↓上澄みを捨て、乾燥させた<br>
-↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexする<br>
+↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexした<br>
@@ Line 256: / Line 256: @@
 制限酵素処理(<i>Xho</i> I)<br>
-下記の組成に従って反応液を調整する<br>
+下記の組成に従って反応液を調整した<br>
 <table border="0"><tr><td>
@@ Line 283: / Line 283: @@
-°Cで20時間静置する
+°Cで20時間静置した
 <br></p>
@@ Line 296: / Line 296: @@
 【実験操作】<br>
 PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）<br>
-</strong>↓PCR産物を400 &micro;lまでddH<sub>2</sub>Oで薄める<br>
+</strong>↓PCR産物を400 μlまでddH<sub>2</sub>Oで薄めた<br>
-↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 &micro;l加えてvoltexする<br>
+↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 μl加えてvoltexした<br>
-↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心する<br>
+↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した<br>
-↓水層のみを新しいチューブに移す<br>
+↓水層のみを新しいチューブに移した<br>
-↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexする<br>
+↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした<br>
-↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心する<br>
+↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した<br>
-↓水層のみを新しいチューブに移す<br>
+↓水層のみを新しいチューブに移した<br>
-↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置する<br>
+↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した<br>
-↓15000rpm、4°Cで10min遠心する<br>
+↓15000rpm、4°Cで10min遠心した<br>
-↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 &micro;l加える<br>
+↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 μl加えた<br>
-↓15000rpm、4°Cで5min遠心する<br>
+↓15000rpm、4°Cで5min遠心した<br>
-↓上澄みを捨て、乾燥させる<br>
+↓上澄みを捨て、乾燥させた<br>
-↓ddH<sub>2</sub>Oを44 &micro;l加えてvoltexする<br>
+↓ddH<sub>2</sub>Oを44 &micro;l加えてvoltexした<br>
-※保存する場合 ↓-20°Cで保存する <br>
+ <br>
 <br>
@@ Line 316: / Line 316: @@
 制限酵素処理(Xba I)<br>
-下記の組成に従って反応液を調整する<br>
+下記の組成に従って反応液を調整した<br>
 <table border="0"><tr><td>
@@ Line 329: / Line 329: @@
 </table></td></tr></table>
-°Cで20時間静置する
+°Cで20時間静置した
 <br>
@@ Line 353: / Line 353: @@
-↓50 Vで60分間電気泳動する<br>
+↓50 Vで60分間電気泳動した<br>
-↓EtBrでゲルを10分間染色する<br>
+↓EtBrでゲルを10分間染色した<br>
-↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br>
+↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した<br>
 <BR>
@@ Line 373: / Line 373: @@
 制限酵素処理(Xba I)<br>
-下記の組成に従って反応液を調整する<br>
+下記の組成に従って反応液を調整した<br>
 <table border="0"><tr><td>
@@ Line 384: / Line 384: @@
 <tr><td align="center"><i>Xba</i>Ⅰ</td><td align="right">1 μl</td></tr>
 <tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 μl</td></tr>
-</table></td></tr></table>37°Cで20時間静置する
+</table></td></tr></table>37°Cで20時間静置した
 <br>
 <BR>
@@ Line 402: / Line 402: @@
-↓LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れる<br>
+↓LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れた<br>
-↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かす<br>
+↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かした<br>
-↓三角フラスコに分注し、アルミ箔で二重にフタをして<br>
+↓三角フラスコに分注し、アルミ箔で二重にフタをした<br>
-↓121°Cで20分オートクレーブ滅菌する<br>
+↓121°Cで20分オートクレーブ滅菌した<br>
@@ Line 417: / Line 417: @@
 ゲルからのDNA抽出<br>
 <BR>
-<a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する<br>
+<a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用した<br>
-↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる<br>
+↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくった<br>
-↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせる<br>
+↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせた<br>
 <tr><td><table border="1" width="230">
@@ Line 429: / Line 429: @@
-↓50 Vで60分間電気泳動する<br>
+↓50 Vで60分間電気泳動した<br>
-↓EtBrでゲルを10分間染色する<br>
+↓EtBrでゲルを10分間染色した<br>
-↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br></p>
+↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した<br></p>
 <BR>
@@ Line 485: / Line 485: @@
-↓50 Vで60分間電気泳動する<br>
+↓50 Vで60分間電気泳動した<br>
-↓EtBrでゲルを40分間染色する<br>
+↓EtBrでゲルを40分間染色した<br>
-↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br>
+↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した<br>
-↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだす<br>
+↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだした<br>
-↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量る<br>
+↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量った<br>
-↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 μl)のBuffer QGを加える<br>
+↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 μl)のBuffer QGを加えた<br>
-↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かす<br>
+↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かした<br>
-↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認する<br>
+↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認すした<br>
-↓ゲル100 mgに対して、当量(100 μl)の2-プロパノールを加え、混ぜる<br>
+↓ゲル100 mgに対して、当量(100 μl)の2-プロパノールを加え、混ぜた<br>
-↓カラムにサンプルをのせる<br>
+↓カラムにサンプルをのせた<br>
-↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てる<br>
+↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てた<br>
-↓500 μlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かす<br>
+↓500 μlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かした<br>
-↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てる<br>
+↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた<br>
-↓750 μlのwash Buffer PEをカラムに加える<br>
+↓750 μlのwash Buffer PEをカラムに加えた<br>
-↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てる<br>
+↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた<br>
-↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえる<br>
+↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた<br>
-↓10,000 rpmで1分間遠心する<br>
+↓10,000 rpmで1分間遠心した<br>
-↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえる<br>
+↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた<br>
-↓37 μlのMilliQを加える<br>
+↓37 μlのMilliQを加えた<br>
-↓10,000 rpmで1分間遠心する<br>
+↓10,000 rpmで1分間遠心した<br>
-↓そのうち5 μlを20倍希釈し、濃度測定をする<br>
+↓そのうち5 μlを20倍希釈し、濃度測定をした<br>
 <BR>
 【結果】<br>
@@ Line 516: / Line 516: @@
 トランスフォーメーション<br>
 ↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した<br>
-↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 &micro;lのコンピテント細胞を分注した<br>
+↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 μlのコンピテント細胞を分注した<br>
-↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br>↓DNAをチューブに3 &micro;l加えて、氷上で30分間冷やした<br>
+↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br>↓DNAをチューブに3 μl加えて、氷上で30分間冷やした<br>
 ↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた<br>
 ↓90 &micro;lのSOC培地を加えた<br>
@@ Line 538: / Line 538: @@
 <br>
-↓LB培地を作製する<br>
+↓LB培地を作製した<br>
-↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌する<br>
+↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌した<br>
-↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌する<br>
+↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌した<br>
-↓65°C程度に冷めたら、必要であれば抗生物質を加える<br>
+↓65°C程度に冷めたら、必要であれば抗生物質を加えた<br>
-↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注する<br>
+↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注した<br>
-↓水平な所に置いて固まらせる<br>
+↓水平な所に置いて固まらせた<br>
 <br>
@@ Line 560: / Line 560: @@
 トランスフォーメーション<br>
 ↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した<br>
-↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 &micro;lのコンピテント細胞を分注した<br>
+↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 μlのコンピテント細胞を分注した<br>
 ↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br>
 ↓DNAをチューブに3 &micro;l加えて、氷上で30分間冷やした<br>
@@ Line 584: / Line 584: @@
 トランスフォーメーション<br>
 ↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した<br>
-↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 &micro;lのコンピテント細胞を分注した<br>
+↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 μlのコンピテント細胞を分注した<br>
 ↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br>
-↓DNAをチューブに3 &micro;l加えて、氷上で30分間冷やした<br>
+↓DNAをチューブに3 μl加えて、氷上で30分間冷やした<br>
 ↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた<br>
 ↓60 &micro;lのSOC培地を加えた<br>
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 トランスフォーメーション<br>
 ↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した<br>
-↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 &micro;lのコンピテント細胞を分注した<br>
+↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 μlのコンピテント細胞を分注した<br>
 ↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br>
-↓DNAをチューブに3 &micro;l加えて、氷上で30分間冷やした<br>
+↓DNAをチューブに3 μl加えて、氷上で30分間冷やした<br>
 ↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた<br>
 ↓60 &micro;lのSOC培地を加えた<br>