|
|
Line 32: |
Line 32: |
| <br> | | <br> |
| <strong>制限酵素処理(<i>Xho</i> I)</strong><br> | | <strong>制限酵素処理(<i>Xho</i> I)</strong><br> |
- | 下記の組成に従って反応液を調整する下記の組成に従って反応液を調整する<br>
| + | 下記の組成に従って反応液を調整した<br> |
| | | |
| <table border="0"><tr><td> | | <table border="0"><tr><td> |
Line 58: |
Line 58: |
| </table> | | </table> |
| 37°Cで20時間静置した | | 37°Cで20時間静置した |
- | <br></p> | + | <br> |
- | </body>
| + | |
| | | |
| | | |
Line 66: |
Line 65: |
| | | |
| | | |
- | <head>
| + | 8/30(火)<BR> |
- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
| + | 武田、横井川<BR> |
- | <title></title>
| + | <BR> |
- | </head>
| + | 【目的】<br> |
- | <body>
| + | PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理(二回目:<i>Xho</i> I)<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">8/30(</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">火</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">)<o:p></o:P></span></p>
| + | 【実験操作】<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">武田、横井川</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | PCR産物の精製(フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿)<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【目的】<br>
| + | ↓PCR産物を400 µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄める<br> |
- | </span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">PCR</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">産物と</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">pUAST-flag vector</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">の制限酵素処理</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">(</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">二回目:</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">Xba I)<br>
| + | ↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexする<br> |
- | <span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">【実験操作】<br>
| + | |
- | <strong>PCR産物の精製(フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿)<br>
| + | |
- | </strong>↓PCR産物を400
| + | |
- | µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄める<br> | + | |
- | ↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 | + | |
- | µl加えてvoltexする<br> | + | |
| ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> | | ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> |
| ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> | | ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> |
Line 86: |
Line 79: |
| ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> | | ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> |
| ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> | | ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> |
- | ↓3M | + | ↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2~3min静置する<br> |
- | CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% | + | |
- | ethanolを3倍量加えて、2~3min静置する<br> | + | |
| ↓15000rpm、4°Cで10min遠心する<br> | | ↓15000rpm、4°Cで10min遠心する<br> |
- | ↓上澄みを捨て、70% | + | ↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加える<br> |
- | ethanol(EtOH)を200 | + | |
- | µl加える<br> | + | |
| ↓15000rpm、4°Cで5min遠心する<br> | | ↓15000rpm、4°Cで5min遠心する<br> |
| ↓上澄みを捨て、乾燥させる<br> | | ↓上澄みを捨て、乾燥させる<br> |
- | ↓ddH<sub>2</sub>Oを44 | + | ↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexする<br> |
- | µl加えてvoltexする<br> | + | |
| ※保存する場合 ↓-20°Cで保存する <br> | | ※保存する場合 ↓-20°Cで保存する <br> |
| <br> | | <br> |
- | <strong>制限酵素処理(Xba | + | <strong>制限酵素処理(Xba I)</strong></span></span></p><br> |
- | I)</strong></span></span></p><br> | + | |
| | | |
| 下記の組成に従って反応液を調整する<br> | | 下記の組成に従って反応液を調整する<br> |
Line 124: |
Line 111: |
| <tr><td> </td><td align="right">total 50 μl</td></tr> | | <tr><td> </td><td align="right">total 50 μl</td></tr> |
| </table></td></tr></table>37°Cで20時間静置する <br> | | </table></td></tr></table>37°Cで20時間静置する <br> |
- | </body>
| |
| | | |
| | | |
- | <head>
| + | 8/31(水)<BR> |
- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
| + | 武田、横井川<BR> |
- | <title></title>
| + | 【目的】<BR> |
- | </head>
| + | 制限酵素処理したPCR産物・vectorのゲル抽出<br> |
- | <body>
| + | <BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">8/31(</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">水</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">)<o:p></o:P></span></p>
| + | 【実験操作】<BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">武田、横井川</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | ゲルからのDNA抽出<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【目的】</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">制限酵素処理した</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">PCR</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">産物・</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">vector</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">のゲル抽出<br>
| + | |
- | </span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">【実験操作】</span></p> | + | |
- | <p><strong>ゲルからのDNA抽出<br>
| + | |
- | </strong>
| + | |
| | | |
| <a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する<br> | | <a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する<br> |
Line 173: |
Line 154: |
| ↓10,000 rpmで1分間遠心する<br> | | ↓10,000 rpmで1分間遠心する<br> |
| ↓そのうち5 μlを20倍希釈し、濃度測定をする<br> | | ↓そのうち5 μlを20倍希釈し、濃度測定をする<br> |
- | </p> | + | <BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【結果】</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><?xml:namespace prefix ="" o ns ="" | + | <BR> |
- | "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p></span></p>
| + | 【結果】<BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">pUAST-flag vector</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">は精製でき、濃度は</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">45.0375ng/</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">μ</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">l</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">であった。</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:p></span></p>
| + | pUAST-flag vectorは精製でき、濃度は45.0375 ng/µlであった。<BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">DIAP2</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">はゲル抽出でバンドが見られなかった。</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:p></span></p> | + | DIAP2はゲル抽出でバンドが見られなかった。<BR> |
- | <p>
| + | |
- | <br></p>
| + | |
| | | |
- | </body> | + | <BR> |
| + | <BR> |
| + | <BR> |
| | | |
- | <head>
| + | 9/1(木)<BR> |
- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
| + | 武田<BR> |
- | <title></title>
| + | <BR> |
- | </head>
| + | 【目的】<br> |
- | <body>
| + | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">9/1(</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">木</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">)<o:p></o:P></span></p>
| + | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">武田</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【目的】<br>
| + | |
| DIAP2のポリメラーゼ連鎖反応<br> | | DIAP2のポリメラーゼ連鎖反応<br> |
- | </p> | + | <BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【実験操作】<br>
| + | 【実験操作】<br> |
- | </span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p>下記の組成に従って試薬をまぜる<br>
| + | 下記の組成に従って試薬をまぜる<br> |
- | 右に示したプログラムで反応を行う<br></o:P></span></p></span> | + | 右に示したプログラムで反応を行う<br> |
| <table border="0"><tr><td> | | <table border="0"><tr><td> |
| <table border="0" width="150"> | | <table border="0" width="150"> |
Line 222: |
Line 199: |
| <tr><td align="center">Extension</td><td align="center">68°C</td><td align="center">100sec</td></tr> | | <tr><td align="center">Extension</td><td align="center">68°C</td><td align="center">100sec</td></tr> |
| <tr><td align="center">End</td><td align="center">4°C</td><td align="center">keep</td><td width="100"> </td></tr> | | <tr><td align="center">End</td><td align="center">4°C</td><td align="center">keep</td><td width="100"> </td></tr> |
- | </table></td></tr></tbody></table><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; COLOR: black; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: Arial; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-theme-font: minor-fareast; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-theme-font: minor-fareast; mso-bidi-font-size: 10.5pt; mso-ansi-language: EN; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">【目的】<span lang="EN"><br> | + | </table></td></tr></tbody></table> |
- | </span> <span lang="EN">PCR</span>産物の確認<br>
| + | |
- | <span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; COLOR: black; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: Arial; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-theme-font: minor-fareast; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-theme-font: minor-fareast; mso-bidi-font-size: 10.5pt; mso-ansi-language: EN; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">【実験操作】<br> | + | <BR> |
- | </span></span>
| + | <BR> |
- | <p><strong>ゲル電気泳動</strong></p>
| + | 【目的】<BR> |
| + | PCR産物の確認<br> |
| + | <BR> |
| + | 【実験操作】<br> |
| + | <strong>ゲル電気泳動</strong></p><BR> |
| | | |
| | | |
Line 247: |
Line 228: |
| | | |
| <br> | | <br> |
- | </body> | + | <BR> |
- | | + | <BR> |
- | <head> | + | 9/5(月)<BR> |
- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
| + | 横井川<BR> |
- | <title></title>
| + | 【目的】<BR> |
- | </head>
| + | PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理(一回目:Xho I)<br> |
- | <body><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">
| + | <BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-bidi-font-size: 10.5pt" lang="EN-US">9/5(</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-size: 10.5pt">月</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-bidi-font-size: 10.5pt" lang="EN-US">)</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | 【実験操作】<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"></span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">横井川</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | PCR産物の精製(フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿)<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【目的】</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | ↓PCR産物を400 µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄める<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">PCR</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">産物と</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">pUAST-flag vector</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">の制限酵素処理(一回目:</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">Xho I</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">)<br>
| + | ↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexする<br> |
- | </p> | + | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【実験操作】<br>
| + | |
- | </span></span><strong>PCR産物の精製(フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿)<br>
| + | |
- | </strong>↓PCR産物を400
| + | |
- | µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄める<br> | + | |
- | ↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 | + | |
- | µl加えてvoltexする<br> | + | |
| ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> | | ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> |
| ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> | | ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> |
Line 270: |
Line 244: |
| ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> | | ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> |
| ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> | | ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> |
- | ↓3M | + | ↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2~3min静置する<br> |
- | CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% | + | |
- | ethanolを3倍量加えて、2~3min静置する<br> | + | |
| ↓15000rpm、4°Cで10min遠心する<br> | | ↓15000rpm、4°Cで10min遠心する<br> |
- | ↓上澄みを捨て、70% | + | ↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加える<br> |
- | ethanol(EtOH)を200 | + | |
- | µl加える<br> | + | |
| ↓15000rpm、4°Cで5min遠心する<br> | | ↓15000rpm、4°Cで5min遠心する<br> |
| ↓上澄みを捨て、乾燥させる<br> | | ↓上澄みを捨て、乾燥させる<br> |
- | ↓ddH<sub>2</sub>Oを44 | + | ↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexする<br> |
- | µl加えてvoltexする<br> | + | |
| ※保存する場合 ↓-20°Cで保存する <br> | | ※保存する場合 ↓-20°Cで保存する <br> |
| + | |
| <br> | | <br> |
- | </p> | + | <BR> |
- | <p><strong>制限酵素処理(<i>Xho</i>
| + | |
- | I)</strong><br> | + | 制限酵素処理(<i>Xho</i> I)<br> |
- | 下記の組成に従って反応液を調整する下記の組成に従って反応液を調整する<br>
| + | 下記の組成に従って反応液を調整する<br> |
| | | |
| <table border="0"><tr><td> | | <table border="0"><tr><td> |
Line 318: |
Line 288: |
| </body> | | </body> |
| | | |
- | <head>
| + | 9/6(火)<BR> |
- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
| + | 横井川<BR> |
- | <title></title>
| + | <BR> |
- | </head>
| + | 【目的】<br> |
- | <body><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">
| + | PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理(二回目:Xba I)<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-bidi-font-size: 10.5pt" lang="EN-US">9/6(</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-size: 10.5pt">火</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-bidi-font-size: 10.5pt" lang="EN-US">)</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | <BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"></span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">横井川</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | 【実験操作】<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【目的】<br>
| + | PCR産物の精製(フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿)<br> |
- | </span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">PCR</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">産物と</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">pUAST-flag vector</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">の制限酵素処理</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">(</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">二回目:</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">Xba I)<br>
| + | </strong>↓PCR産物を400 µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄める<br> |
- | <span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">【実験操作】<br> | + | ↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexする<br> |
- | <strong>PCR産物の精製(フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿)<br>
| + | |
- | </strong>↓PCR産物を400 | + | |
- | µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄める<br> | + | |
- | ↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 | + | |
- | µl加えてvoltexする<br> | + | |
| ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> | | ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> |
| ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> | | ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> |
Line 338: |
Line 303: |
| ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> | | ↓10000rpm、4°Cで2~3min遠心する<br> |
| ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> | | ↓水層のみを新しいチューブに移す<br> |
- | ↓3M | + | ↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2~3min静置する<br> |
- | CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% | + | |
- | ethanolを3倍量加えて、2~3min静置する<br> | + | |
| ↓15000rpm、4°Cで10min遠心する<br> | | ↓15000rpm、4°Cで10min遠心する<br> |
- | ↓上澄みを捨て、70% | + | ↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加える<br> |
- | ethanol(EtOH)を200 | + | |
- | µl加える<br> | + | |
| ↓15000rpm、4°Cで5min遠心する<br> | | ↓15000rpm、4°Cで5min遠心する<br> |
| ↓上澄みを捨て、乾燥させる<br> | | ↓上澄みを捨て、乾燥させる<br> |
- | ↓ddH<sub>2</sub>Oを44 | + | ↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexする<br> |
- | µl加えてvoltexする<br> | + | |
| ※保存する場合 ↓-20°Cで保存する <br> | | ※保存する場合 ↓-20°Cで保存する <br> |
| + | |
| <br> | | <br> |
- | <strong>制限酵素処理(Xba | + | <BR> |
- | I)</strong></span></span></p> | + | |
- | <br> | + | 制限酵素処理(Xba I)<br> |
| | | |
| 下記の組成に従って反応液を調整する<br> | | 下記の組成に従って反応液を調整する<br> |
Line 371: |
Line 332: |
| | | |
| <br> | | <br> |
- | </body> | + | <BR> |
- | | + | 9/7(水)<BR> |
- | <head>
| + | 横井川<BR> |
- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
| + | 【目的】<BR> |
- | <title></title>
| + | 制限酵素処理したPCR産物・vectorのゲル抽出<BR> |
- | </head>
| + | <BR> |
- | <body>
| + | 【実験操作】<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-bidi-font-size: 10.5pt" lang="EN-US">9/7(</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-size: 10.5pt">水</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-bidi-font-size: 10.5pt" lang="EN-US">)</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | ゲルからのDNA抽出<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-size: 10.5pt">横井川</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | <BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【目的】</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">制限酵素処理した</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">PCR</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">産物・</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">vector</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">のゲル抽出</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p> | + | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【実験操作】<br>
| + | |
- | </span></p>
| + | |
- | <p><strong>ゲルからのDNA抽出<br>
| + | |
- | </strong> | + | |
- | | + | |
| <a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する<br> | | <a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する<br> |
| ↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる<br> | | ↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる<br> |
Line 401: |
Line 355: |
| ↓50 Vで60分間電気泳動する<br> | | ↓50 Vで60分間電気泳動する<br> |
| ↓EtBrでゲルを10分間染色する<br> | | ↓EtBrでゲルを10分間染色する<br> |
- | ↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br></p> | + | ↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; TEXT-INDENT: -12pt; MARGIN: 0mm 0mm 0pt 12pt; mso-pagination: widow-orphan; mso-char-indent-count: -1.0" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【結果】</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; TEXT-INDENT: -12pt; MARGIN: 0mm 0mm 0pt 12pt; mso-pagination: widow-orphan; mso-char-indent-count: -1.0" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">バンドが確認できなかったためゲル抽出を行う事が出来なかった。</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | |
- | <p></p>
| + | |
| | | |
- | </body> | + | <BR> |
| + | <BR> |
| + | 【結果】<BR> |
| + | バンドが確認できなかったためゲル抽出を行う事が出来なかった。<BR> |
| | | |
- | <head> | + | <BR> |
- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis"> | + | <BR> |
- | <title></title> | + | <BR> |
- | </head>
| + | |
- | <body>
| + | |
- | <p>9/17(土)<br>
| + | |
- | <span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【目的】<br>
| + | |
- | </span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">PCR</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">産物</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">の制限酵素処理</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">(</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">二回目:</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA" lang="EN-US">Xba I)<br>
| + | |
- | <span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">【実験操作】<br>
| + | |
| | | |
- | </span></span>
| + | 9/17(土)<BR> |
- | <strong>制限酵素処理(Xba | + | 【目的】<br> |
- | I)</strong><br> | + | PCR産物の制限酵素処理(二回目:Xba I)<br> |
| + | <BR> |
| + | 【実験操作】<br> |
| + | 制限酵素処理(Xba I)<br> |
| | | |
| 下記の組成に従って反応液を調整する<br> | | 下記の組成に従って反応液を調整する<br> |
Line 435: |
Line 386: |
| </table></td></tr></table>37°Cで20時間静置する | | </table></td></tr></table>37°Cで20時間静置する |
| <br> | | <br> |
| + | <BR> |
| | | |
- | </p>
| + | 9/18(日)<BR> |
- | </body>
| + | 横井川<BR> |
- | <head>
| + | LB培地<BR> |
- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
| + | |
- | <title></title>
| + | |
- | </head>
| + | |
- | <body>
| + | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-bidi-font-size: 10.5pt" lang="EN-US">9/18(日</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-bidi-font-size: 10.5pt" lang="EN-US">)</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-size: 10.5pt">横井川
| + | |
- | </span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin; mso-bidi-font-size: 10.5pt"> <br> | + | |
- | </span><strong>LB培地</strong>
| + | |
- | </p>
| + | |
| | | |
| <tr><td><table border="1" width="200"> | | <tr><td><table border="1" width="200"> |
Line 468: |
Line 411: |
| | | |
| | | |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【目的】</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| + | 【目的】<BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">制限酵素処理した</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US">PCR</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">産物</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">のゲル抽出</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p> | + | 制限酵素処理したPCR産物のゲル抽出<BR> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; MARGIN: 0mm 0mm 0pt; mso-pagination: widow-orphan" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【実験操作】<br>
| + | <BR> |
- | </span></p>
| + | 【実験操作】<br> |
- | <p><strong>ゲルからのDNA抽出<br>
| + | ゲルからのDNA抽出<br> |
- | </strong> | + | <BR> |
- | | + | |
| <a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する<br> | | <a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する<br> |
| ↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる<br> | | ↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる<br> |
Line 490: |
Line 432: |
| ↓EtBrでゲルを10分間染色する<br> | | ↓EtBrでゲルを10分間染色する<br> |
| ↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br></p> | | ↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br></p> |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; TEXT-INDENT: -12pt; MARGIN: 0mm 0mm 0pt 12pt; mso-pagination: widow-orphan; mso-char-indent-count: -1.0" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">【結果】</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| |
- | <p style="TEXT-ALIGN: left; TEXT-INDENT: -12pt; MARGIN: 0mm 0mm 0pt 12pt; mso-pagination: widow-orphan; mso-char-indent-count: -1.0" class="MsoNormal" align="left"><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-font-family: Century; mso-ascii-theme-font: minor-latin; mso-fareast-font-family: 'MS 明朝'; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-font-family: Century; mso-hansi-theme-font: minor-latin">バンドが確認できなかったためゲル抽出を行う事が出来なかった。</span><span style="FONT-FAMILY: 'MS Pゴシック'; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: 'MS Pゴシック'; mso-font-kerning: 0pt" lang="EN-US"><o:p></o:P></span></p>
| |
- | <p></p>
| |
| | | |
- | </body> | + | <BR> |
- | <head> | + | <BR> |
- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis"> | + | 【結果】<BR> |
- | <title></title> | + | バンドが確認できなかったためゲル抽出を行う事が出来なかった。<BR> |
- | </head>
| + | |
- | <body>
| + | |
- | <p>9/20(火)<br>
| + | |
- | <span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; COLOR: black; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: Arial; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-theme-font: minor-fareast; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-theme-font: minor-fareast; mso-bidi-font-size: 10.5pt; mso-ansi-language: EN; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">【目的】<span lang="EN"><br>
| + | |
- | </span> DIAP2の<span lang="EN">PCR</span>産物の確認<br>
| + | |
- | </span><span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; COLOR: black; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: Arial; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-theme-font: minor-fareast; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-theme-font: minor-fareast; mso-bidi-font-size: 10.5pt; mso-ansi-language: EN; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">【実験操作】</span><br><strong>ゲル電気泳動</strong></p>
| + | |
| | | |
| + | <BR> |
| + | <BR> |
| + | <BR> |
| + | 9/20(火)<br> |
| + | 【目的】<BR> |
| + | DIAP2のPCR産物の確認<br> |
| + | <BR> |
| + | 【実験操作】<BR> |
| + | ゲル電気泳動<BR> |
| + | <BR> |
| | | |
| ゲル1枚当たりの組成 | | ゲル1枚当たりの組成 |
Line 522: |
Line 465: |
| ↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br> | | ↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br> |
| <br> | | <br> |
- | <span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; COLOR: black; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: Arial; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-theme-font: minor-fareast; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-theme-font: minor-fareast; mso-bidi-font-size: 10.5pt; mso-ansi-language: EN; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">【目的】<span lang="EN"><br> | + | <BR> |
- | </span></span>MLFバンドを切り出し、そのゲル片からDNAを抽出・精製する。<br> | + | 【目的】<br> |
| + | MLFバンドを切り出し、そのゲル片からDNAを抽出・精製する。<br> |
| + | <BR> |
| 【実験方法】<br> | | 【実験方法】<br> |
- | <strong>ゲルからのDNA抽出<br>
| + | ゲルからのDNA抽出<br> |
- | </strong>
| + | |
| | | |
| <a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する<br> | | <a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する<br> |
Line 562: |
Line 506: |
| ↓10,000 rpmで1分間遠心する<br> | | ↓10,000 rpmで1分間遠心する<br> |
| ↓そのうち5 μlを20倍希釈し、濃度測定をする<br> | | ↓そのうち5 μlを20倍希釈し、濃度測定をする<br> |
| + | <BR> |
| 【結果】<br> | | 【結果】<br> |
- | 濃度は70 | + | 濃度は70 ng/µlだった。<br> |
- | ng/µlだった。<br> | + | |
| <br> | | <br> |
| <br> | | <br> |
- | <span style="FONT-FAMILY: 'MS 明朝','serif'; COLOR: black; FONT-SIZE: 12pt; mso-bidi-font-family: Arial; mso-font-kerning: 0pt; mso-ascii-theme-font: minor-fareast; mso-fareast-theme-font: minor-fareast; mso-hansi-theme-font: minor-fareast; mso-bidi-font-size: 10.5pt; mso-ansi-language: EN; mso-fareast-language: JA; mso-bidi-language: AR-SA">【目的】<span lang="EN"><br>
| + | 【目的】<br> |
- | </span></span>MLFのライゲーション産物の増殖<br>
| + | MLFのライゲーション産物の増殖<br> |
- | 【実験方法】<br>トランスフォーメーション<br>↓氷上でコンピテント細胞(DH5 | + | 【実験方法】<br> |
- | Alpha:大腸菌株)を解凍した<br>↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 | + | トランスフォーメーション<br> |
- | µlのコンピテント細胞を分注した<br>↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br>↓DNAをチューブに3 µl加えて、氷上で30分間冷やした<br>↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた<br>↓90 | + | ↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した<br> |
- | µlのSOC培地を加えた<br>↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した<br>↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。<br>↓37゜Cで一晩インキュベートした。<br><br><br> | + | ↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 µlのコンピテント細胞を分注した<br> |
| + | ↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br>↓DNAをチューブに3 µl加えて、氷上で30分間冷やした<br> |
| + | ↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた<br> |
| + | ↓90 µlのSOC培地を加えた<br> |
| + | ↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した<br> |
| + | ↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。<br> |
| + | ↓37゜Cで一晩インキュベートした。<br> |
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- | <br>
| + | <br> |
| + | <br> |
| + | <br> |
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- | <br><br>
| + | 9/21(水)<br> |
- | | + | LBプレート作成<BR> |
- | </body>
| + | |
- | | + | |
- | <head>
| + | |
- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
| + | |
- | <title></title>
| + | |
- | </head>
| + | |
- | <body>
| + | |
- | <p>9/21(水)<br>
| + | |
- | <strong>LBプレート作成</strong>
| + | |
| </p><table border="1" width="170"> | | </p><table border="1" width="170"> |
| <tr><td width="100" align="center">LB培地</td><td width="70" align="right"> </td></tr> | | <tr><td width="100" align="center">LB培地</td><td width="70" align="right"> </td></tr> |
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Line 559: |
| 【実験方法】<br> | | 【実験方法】<br> |
| トランスフォーメーション<br> | | トランスフォーメーション<br> |
- | ↓氷上でコンピテント細胞(DH5 | + | ↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した<br> |
- | Alpha:大腸菌株)を解凍した<br> | + | ↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 µlのコンピテント細胞を分注した<br> |
- | ↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 | + | |
- | µlのコンピテント細胞を分注した<br> | + | |
| ↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br> | | ↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br> |
- | ↓DNAをチューブに3 | + | ↓DNAをチューブに3 µl加えて、氷上で30分間冷やした<br> |
- | µl加えて、氷上で30分間冷やした<br> | + | |
| ↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた<br> | | ↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた<br> |
- | ↓60 | + | ↓60 µlのSOC培地を加えた<br> |
- | µlのSOC培地を加えた<br> | + | |
| ↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した<br> | | ↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した<br> |
| ↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。<br> | | ↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。<br> |
| ↓37゜Cで一晩インキュベートした。<br> | | ↓37゜Cで一晩インキュベートした。<br> |
- | <br>
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- | <br><br>
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| + | <br> |
| + | <br> |
| + | <br> |
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- | </body>
| + | 9/22(木)<br> |
- | | + | |
- | <head>
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- | <meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
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- | <title></title>
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- | </head>
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- | <body>
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- | <p>9/22(木)<br>
| + | |
| 【目的】<br> | | 【目的】<br> |
- | pSB1C3 vectorとMLF、pSB1C3 | + | pSB1C3 vectorとMLF、pSB1C3 vectorとGFPのライゲーション<br> |
- | vectorとGFPのライゲーション<br> | + | |
| <br> | | <br> |
| 【実験方法】<br> | | 【実験方法】<br> |
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| 【実験方法】<br> | | 【実験方法】<br> |
| トランスフォーメーション<br> | | トランスフォーメーション<br> |
- | ↓氷上でコンピテント細胞(DH5 | + | ↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した<br> |
- | Alpha:大腸菌株)を解凍した<br> | + | ↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 µlのコンピテント細胞を分注した<br> |
- | ↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 | + | |
- | µlのコンピテント細胞を分注した<br> | + | |
| ↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br> | | ↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した<br> |
- | ↓DNAをチューブに3 | + | ↓DNAをチューブに3 µl加えて、氷上で30分間冷やした<br> |
- | µl加えて、氷上で30分間冷やした<br> | + | |
| ↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた<br> | | ↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた<br> |
- | ↓60 | + | ↓60 µlのSOC培地を加えた<br> |
- | µlのSOC培地を加えた<br> | + | |
| ↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した<br> | | ↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した<br> |
| ↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。<br> | | ↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。<br> |