Team:NTNU Trondheim/Journal

From 2011.igem.org

(Difference between revisions)
(→Lab Journal)
(→Lab Journal)
Line 9: Line 9:
Lab equipment was prepared: Pipette tips, 1.5 ml tubes, toothpicks, SOC, LA with 100 µg/ml ampicillin/ 100 µg/ml spectinomycin (from 1988). Recipies are given in recipies section.
Lab equipment was prepared: Pipette tips, 1.5 ml tubes, toothpicks, SOC, LA with 100 µg/ml ampicillin/ 100 µg/ml spectinomycin (from 1988). Recipies are given in recipies section.
 +
'''Friday 24/6'''
-
Fredag 24. juni
+
Biobricks were taken out from kit by resuspending them in sterile water followed by transformation to ''E.coli'' DH5 alpha. The biobricks that were taken out are given below:
-
Resuspenderte og transformerte BioBricks rrnB P1, lamda pR, RFP og Lux. Prosedyre gitt i Prosedyrer / Oppskrifter.
+
 
 +
{|
 +
!Abbreviation
 +
!Name
 +
!Part number
 +
!Resistance
 +
|-
 +
|
 +
 
 +
rrnB P1, lamda pR, RFP og Lux. Prosedyre gitt i Prosedyrer / Oppskrifter.
Lørdag 25. juni
Lørdag 25. juni

Revision as of 08:44, 5 July 2011



Lab Journal

Thursday 23/6

Lab equipment was prepared: Pipette tips, 1.5 ml tubes, toothpicks, SOC, LA with 100 µg/ml ampicillin/ 100 µg/ml spectinomycin (from 1988). Recipies are given in recipies section.

Friday 24/6 

Biobricks were taken out from kit by resuspending them in sterile water followed by transformation to E.coli DH5 alpha. The biobricks that were taken out are given below:
Abbreviation Name Part number Resistance 
rrnB P1, lamda pR, RFP og Lux. Prosedyre gitt i Prosedyrer / Oppskrifter.

Lørdag 25. juni Flyttet plater til kjøleskap.

Søndag 26. juni

De fire Biobrickene (p1, lamda pR, RFP og Lux) ble inokulert i 3mL LB for isolering av plasmid.

Mandag 27. juni

Plasmid ble isolert fra P1, lamda pR, RFP og Lux Biobrickene ved bruk av promega miniprep kit.

Konsentrasjoner:

P1 98,4 ng / µL lambda Pr: 43,8 ng / µL RFP 141,8 ng / µL Lux 62,8 ng / µL


Transformantene med lux/RFP var verken røde eller lysende. Det ble foreslått at dette kunne være pga. mulig ekspresjon av tetR som er repressor for pTet som styrer ekspresjon av RFP/lux. Denne antagelsen ble bekreftet av erfaringer som er gjort av tidligere grupper med samme konstrukt.

Siden tetR sin påvirking på pTet blir inhibert av Tc(tetracyclin) prøvde vi å gro cellene i subletale konsentrasjoner av Tc.

E. coli med plasmid med RFP-konstruktet ble grodd i 0 0,1 0,3 0,6 1,0 1,5 og 100 µg/ml Tc i 3 ml LB.


Måling av fluorescens: Hanne Jørgensen kan ordne dette, dersom vi gror kultur med RFP-uttrykk og uten (blank kontroll). Hun må også bli informert om bølgelengde for exitation (584 nm) og emission (607 nm).

mail : hanne.jorgensen@biotech.ntnu.no

Tirsdag 28 juni

Jon Har Bursdag! Jippi!! Hoi Hoi Hoi!!

Ligering av lambda pR inn i backbone:

· Kutte RFP og RFP + luxI construct med EcoRI og XbaI.

· Kutte lambda pR med EcoRI og SpeI

· Ligate them bitches – win


Kuttet RFP, Lux og Lambda Pr promotor ved bruk av iGem sin protokoll. http://partsregistry.org/Help:Protocols/Restriction_Digest


Alternativ design av system som skal gjøre cellene røde ved tilsats av ppGpp:

Retrieved from "http://2011.igem.org/Team:NTNU_Trondheim/Journal"