Team:Lyon-INSA-ENS/Realisation/Protocols/FermentasFr

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This protocol aims at cutting plasmids on specific restriction sites using restriction enzymes.  
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Ce protocole permet de couper les plasmides au niveau de sites de restriction spécifiques, en utilisant des enzymes de restriction.
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<b>1.</b> In an eppendorf tube, add the following solutions in any order :<br/>
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<b>1.</b> Dans un tube Eppendorf, ajouter, dans un ordre quelconque, les solutions suivantes: <br/>
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-250 ng DNA ( if the concentration is unknown, use 5µL )<br/>
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-250 ng d'ADN ( si la concentration est inconnue, utiliser 5µL )<br/>
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-2.5µL (1X) or 5µL (2X) 10X tango buffer ( this depends on the enzymes used )<br/>
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-2.5µL (1X) ou 5µL (2X) de tampon "tango" 10X ( la quantité introduite dépend des enzymes utilisées)<br/>
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-de l'eau pour atteindre un volume total de 25µL après addition des enzymes  
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<b>2.</b> Add 1µL of each one of the desired enzymes.
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<b>2.</b> Ajouter 1µL de chacune des enzymes.
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<b>3.</b> Incubate at 37°C for 1h30
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<b>3.</b> Incuber à 37°C pendant 1h30.
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<b>4.</b> Incubate at 70°C for 10 mn to inactivate the restriction enzymes.
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<b>4.</b> Incuber à 70°C pendant 10min afin d'inactiver les enzymes de restriction.
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Latest revision as of 13:52, 22 August 2011





Digestion Fermentas





Ce protocole permet de couper les plasmides au niveau de sites de restriction spécifiques, en utilisant des enzymes de restriction.





Procédure



1. Dans un tube Eppendorf, ajouter, dans un ordre quelconque, les solutions suivantes:
-250 ng d'ADN ( si la concentration est inconnue, utiliser 5µL )
-2.5µL (1X) ou 5µL (2X) de tampon "tango" 10X ( la quantité introduite dépend des enzymes utilisées)
-de l'eau pour atteindre un volume total de 25µL après addition des enzymes


2. Ajouter 1µL de chacune des enzymes.


3. Incuber à 37°C pendant 1h30.


4. Incuber à 70°C pendant 10min afin d'inactiver les enzymes de restriction.








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