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Team:KIT-Kyoto/Notebook/LabNoteJ/DIAP2-MALTJ9
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:松浪 | :松浪 | ||
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<b>Results</b> | <b>Results</b> | ||
Latest revision as of 20:04, 5 October 2011
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| Home | Team | Project | Parts | Notebook | Safety | Human Practice | Attributions |
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| Home > Notebook > Lab Note > September | Language：English/Japanese |
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９月１日
Member
- 武田
- DIAP2について、以下の条件でPCRを行った。
PCR条件 10 µM Primer F 1.5 µl 10 µM Primer R 1.5 µl Template DNA 1 µl 10 x PCR Buffer 5 µl dNTPs 5 µl MgSO4 2 µl or 4 µl ddH2O 33 µl or 31 µl KOD+ polymelase 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min Denature 94°C 15sec 35 Cyle Anneling 50.5°C 30sec Extension 68°C 100sec End 4°C keep
- PCR産物が増幅していることを確認するため、電気泳動を行った。
Results
- 泳動後の写真
-
- 正しい位置にバンドが見られた。
９月５日
Member
- 横井川
- 1日に確認したDIAP2をフェノールクロロホルム処理し、下表に従って制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)
DIAP2 PCR産物 in ddH2O 44 μl 10 x H Buffer 5 μl XhoⅠ 1 μl total 50 μl
- 37°Cで20時間静置した
９月６日
Member
- 横井川
- 1日に確認したDIAP2をフェノールクロロホルム処理し、下表に従って制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)
DIAP2 PCR産物 in ddH2O 44 μl 10 x M Buffer 5 μl XbaⅠ 1 μl total 50 μl
- 37°Cで20時間静置した。
９月７日
Member
- 横井川
- [http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx QIAquick Gel Extraction Kit]を使用してゲルからDIAP2のDNAを抽出した。
Results
- バンドが確認できなかったためゲル抽出を行う事が出来なかった。
９月１２日
Member
- 松浪、横井川
- DIAP2について以下のプライマーを用いて、以下の条件でPCRを行った。
- F primer GCTTCTCGATTGACGGAGCTGGGCATGGAGCT
- Tm値 62 °C
- R primer GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA
- Tm値 66.4°C
- 増幅サイズ 約1514 bp
PCR条件 10 µM Primer F 1.5 µl 10 µM Primer R 1.5 µl Template DNA 1 µl 10 x PCR Buffer 5 µl dNTPs 5 µl MgSO4 2 µl ddH2O 33 µl KOD+ polymelase 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min Denature 94°C 15sec 35 Cycle Anneling 50.5°C 30sec Extension 68°C 1min40sec End 4°C keep
- 再度、違う条件下でアニーリングのテストを行った。
- アニーリング 50.5°C
９月１３日
Member
- 松浪、横井川
- 12日のPCR産物が増幅しているか確かめるため、電気泳動を行った。
Results
- 泳動後の写真
-
- 左から順に1レーン；マーカー（1 Kbp）、2・3レーン；DIAP2
- 期待される場所にバンドが見られた。
９月１４日
Member
- 松浪、横井川
- API2-MALT1について以下のプライマーを用いて、以下の条件でPCRを行った。
- F primer GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT
- Tm値 57.8 °C
- R primer GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA
- Tm値 56.5 °C
- 増幅サイズ 約3131 bp
PCR条件 10 µM Primer F 0.4 µl 10 µM Primer R 0.4 µl Template DNA 1 µl 10 x Ex Taq Buffer 2 µl Takara Ex Taq 0.1 µl 2.0 mM dNTPs 2 µl ddH2O 14.1 µl total 20 µl Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min Denature 94°C 30sec 37 Cycle Anneling 51.5°C 30sec Extension 72°C 3min20sec +Extension 72°C 10min End 4°C keep
- PCR産物が増幅していることを確認するため、電気泳動を行った。
Results
- 泳動後の写真
-
マーカー（1 Kbp）のみバンドが見られた。
９月１５日
Member
- 松浪、横井川
- API2-MALT1、DIAP2について、以下の条件でPCRを行った。
- API2-MALT1
PCR条件 10 µM Primer F 0.4 µl 10 µM Primer R 0.4 µl Template DNA 1 µl 10 x Ex Taq Buffer 2 µl Takara Ex Taq 0.1 µl 2.0 mM dNTPs 2 µl ddH2O 14.1 µl total 20 µl Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min Denature 94°C 30sec 37 Cycle Anneling 53°C 30sec Extension 72°C 3min20sec +Extension 72°C 10min End 4°C keep
- DIAP2
PCR条件 10 µM Primer F 1.5 µl 10 µM Primer R 1.5 µl Template DNA 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 5 µl MgSO4 2 µl ddH2O 33 µl KOD Plus 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min Denature 94°C 15sec 35 Cycle Anneling 50.5°C 30sec Extension 68°C 1min 40sec End 4°C keep
- PCR産物が増幅していることを確認するため、電気泳動を行った。
- DIAP2のPCR産物を、下表に従って制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)
DIAP2 PCR産物 in ddH2O 44 µl 10 x H Buffer 5 µl XhoⅠ 1 µl total 50 µl
37°Cで20時間静置した。
Results
- 泳動後の写真
-
- 左から順に1レーン；マーカー（1 Kbp）、2～5レーン；DIAP2、6～8レーン；API2-MALT1
- DIAP2に関しては予想される位置にバンドが見られたが、API2-MALT1は見られなかった。
９月１６日
Member
- 松浪、横井川
- DIAP2のPCR産物を、下表に従って制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)
DIAP2 PCR産物 in ddH2O 44 µl 10 x M Buffer 5 µl XbaⅠ 1 µl total 50 µl
９月１７日
Member
- 松浪、横井川
- [http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx QIAquick Gel Extraction Kit]を使用してゲルからDIAP2のDNAを抽出した。
Results
- 泳動後の写真
-
- マーカー（1 Kbp）のバンドのみが見られた。制限酵素処理を行ったDIAP2のサンプルはすべてバンドが見られなかった。
９月１８日
Member
- 松浪
- コンピテントセル（DH5α）を作成した。
９月１９日
Member
- 松浪
- コンピテントセル（DH5α）を作成した。
９月２１日
Member
- 松浪
- 1.コンピテントセル（DH5α）を作成した。
- 2.DIAP2について、以下の条件でPCRを行った。
PCR条件 10 µM Primer F 1.5 µl 10 µM Primer R 1.5 µl Template DNA 1 µl 10 x PCR Buffer 5 µl dNTPs 5 µl MgSO4 2 µl ddH2O 33 µl KOD+ polymelase 1 µl total 50 µl Cycle条件 Pre-Denature 94°C 2min Denature 94°C 15sec 35 Cycle Anneling 50.5°C 30sec Extension 68°C 1kb/min End 4°C keep
- PCR産物が増幅していることを確認するため、電気泳動を行った。
- DIAP2のPCR産物を、下表に従って制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)
| DIAP2 |
| PCR産物 in ddH2O | 44 µl |
| 10 x H Buffer | 5 µl |
| XhoⅠ | 1 µl |
| total 50 µl |
Results
- 1.ODを測定したが、OD＝0.9を超えてしまった。
- 泳動後の写真
-
- 左から順に1レーン；マーカー（1 Kbp）、2～7レーン；DIAP2
- 全てのサンプルでPCRが成功した。
９月２２日
Member
- 不明★
- DIAP2のPCR産物を、下表に従って制限酵素処理を行った。(37°C、overnight)
DIAP2 PCR産物 in ddH2O 44 µl 10 x M Buffer 5 µl XbaⅠ 1 µl total 50 µl
９月２３日
Member
- 松浪
- [http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx QIAquick Gel Extraction Kit]を使用してゲルからDIAP2のDNAを抽出した。
Results
- 泳動後の写真
-
- マーカー（1 Kbp）のみバンドが見られ、制限酵素処理を行ったDIAP2のサンプルはすべてバンドが見られなった。
９月２５日
Member
- 松浪
- コンピテントセル(DH5α)を作成した。
９月２７日
Member
- 松浪
- コンピテントセル(DH5α)を作成した。
