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Team:KIT-Kyoto/ぷろとこる
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| + | <tr><td width="100px" align=center>Solution I</td><td width="200px" align=right>50 mM グルコース (MW 180)</td></tr> | ||
| + | <tr><td> </td><td align=right>10 mM EDTA(pH 8.0)</td></tr> | ||
| + | <tr><td> </td><td align=right>25 mM Tris-HCl (pH 8.0)</td></tr> | ||
| + | <tr><td align=center>Solution II</td><td align=right>0.2 N NaOH</td></tr> | ||
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| + | <tr><td align=center>Solution III</td><td align=right>3 M 酢酸カリウム</td></tr> | ||
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Revision as of 06:17, 26 August 2011
LB培地
| bacto tryptone | 10 g |
| bacto yeast evtract | 5 g |
| NaCl | 10 g |
↓LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れる
↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かす
↓三角フラスコに分注し、アルミ箔で二重にフタをして
↓121 ℃で20分オートクレーブ滅菌する
LBプレート
| LB培地 | |
| bacto-agar | 15 g/l |
↓LB培地を作製する
↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌する
↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌する
↓65 ℃程度に冷めたら、必要であれば抗生物質を加える
↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注する
↓水平な所に置いて固まらせる
トランスフォーメーション
去年のコピペばーじょん☆
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍する
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに100 µlのコンピテント細胞を分注する
↓余ったコンピテント細胞は-80 ℃の冷凍庫に戻す
↓DNAをチューブに1～5 µl加えて、氷上で30分間冷やす
↓42 ℃で45秒間熱ショックを与える
↓0.9 mlのSOC培地を加える
↓37 ℃で1時間、振りながら回復培養する
↓1 mlをLBプレート(+amp,+kan,+camのいずれか)にまく
↓37 ℃で一晩培養する
今年のシエロさんにもろたプリント☆
↓ligation後の反応液を全量、コンピテント細胞(大腸菌)へ加える
↓氷上で15分間冷やす
↓43 ℃で30秒間熱ショクを与える
↓氷上で10分間冷やす
↓SOCまたはLB(-)溶液を等量加えて、37 ℃(API2-MALT1は30 ℃)で30分間回復培養する
↓LB(+amp)プレートに塗る
↓37 ℃(API2-MALT1は30 ℃)で培養する
アルカリミニプレップ
| Solution I | 50 mM グルコース (MW 180) |
| 10 mM EDTA(pH 8.0) | |
| 25 mM Tris-HCl (pH 8.0) | |
| Solution II | 0.2 N NaOH |
| 1% SDS | |
| Solution III | 3 M 酢酸カリウム |
| 1.8 M 酢酸 |
