Team:KIT-Kyoto/ぷろとこる

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Revision as of 06:08, 26 August 2011

ぷろとこるうｐページ(^ω^)/

LB培地

bacto tryptone	10 g
bacto yeast evtract	5 g
NaCl	10 g

↓LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れる
↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かす
↓三角フラスコに分注し、アルミ箔で二重にフタをして
↓121 ℃で20分オートクレーブ滅菌する

LBプレート

LB培地
bacto-agar	15 g/l

↓LB培地を作製する
↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌する
↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌する
↓65 ℃程度に冷めたら、必要であれば抗生物質を加える
↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注する
↓水平な所に置いて固まらせる

トランスフォーメーション

去年のコピペばーじょん☆
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍する
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに100 µlのコンピテント細胞を分注する
↓余ったコンピテント細胞は-80 ℃の冷凍庫に戻す
↓DNAをチューブに1～5 µl加えて、氷上で30分間冷やす
↓42 ℃で45秒間熱ショックを与える
↓0.9 mlのSOC培地を加える
↓37 ℃で1時間、振りながら回復培養する
↓1 mlをLBプレート(+amp,+kan,+camのいずれか)にまく
↓37 ℃で一晩培養する

今年のシエロさんにもろたプリント☆
↓ligation後の反応液を全量、コンピテント細胞(大腸菌)へ加える
↓氷上で15分間冷やす
↓43 ℃で30秒間熱ショクを与える
↓氷上で10分間冷やす
↓SOCまたはLB(-)溶液を等量加えて、37 ℃(API2-MALT1は30 ℃)で30分間回復培養する
↓LB(+amp)プレートに塗る
↓37 ℃(API2-MALT1は30 ℃)で培養する

@@ Line 22: / Line 22: @@
-LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れる<BR>
+↓LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れる<BR>
 ↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かす<BR>
 ↓三角フラスコに分注し、アルミ箔で二重にフタをして<BR>
-℃で20分オートクレーブ滅菌する<BR>
+↓121 ℃で20分オートクレーブ滅菌する<BR>
@@ Line 35: / Line 35: @@
 <tr><td width="200px" align=center>LB培地</td><td width="70px" align=right>&nbsp;</td></tr>
 <tr><td align=center>bacto-agar</td><td align=right>15 g/l</td></tr>
-<tr><td align=center>アンピシリン</td><td align=right>50 µg/ml</td></tr>
 </table>
 <BR>
-LB培地を作製する。<BR>
+↓LB培地を作製する<BR>
 ↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌する<BR>
 ↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌する<BR>
-↓65 ℃程度に冷めたら、アンピシリンを1 mlあたり50 µg加える<BR>
+↓65 ℃程度に冷めたら、必要であれば抗生物質を加える<BR>
 ↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注する<BR>
-水平な所に置いて固まらせる<BR>
+↓水平な所に置いて固まらせる<BR>
@@ Line 55: / Line 54: @@
 <BR>
-<font color="#d9333f">去年のコピペばーじょん☆</font>
+<font color="#f4b3c2">去年のコピペばーじょん☆</font>
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@@ Line 71: / Line 70: @@
 <BR><BR>
-<font color="#006e54">今年のシエロさんにもろたプリント☆</font>
+<font color="#89c3eb">今年のシエロさんにもろたプリント☆</font>
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