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Team:Lyon-INSA-ENS/Realisation/Week3Fr
From 2011.igem.org
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Revision as of 09:42, 29 July 2011
Semaine 3
Du Lundi le 27 juin au Vendredi 1er Juillet 2011
Monday
Une autre PCR est lancée pour collecter plus d'ADN (Echec).
Culture des mauvaises souches pour les transformations...(Echec : la souche avait déjà un plasmide).
Précipitation alcoolique des produits de PCR des semaines précédentes.
Mardi
Culture des cellules NM522 pour des transformations ultérieures et culture de bactéries Curli pour extraction.
Ligation des produits de PCR dans pGem-T easy vector pour en faire des parts standards. Transformation dans la souche NM522 des produits de ligation. Selection sur boîtes d'ampicilline, d'X-Gal, d'IPTG. Seul CsgAB n'a pas été transformé ce jour-là.
Mercredi
Miniprep, digestion et électrophorèse du plasmide Curli.
Sélection des colonies blanches sur la boîte pour les parts RcnR and CsgEFG. Culture liquide pour miniprep.
Transformation dans NM522 de la part CsgAB.
Jeudi
Transformation chimique au CaCl2 de certains "iGEM kit distribution DNA" :
Plate 1 :
18A (constitutive promoter, Amp )
2M (RBS fort, Amp )
5L (RBS faible, Amp )
22M ( RBS+YFP, Amp)
Plate 2 :
24E (YFP, Amp + Kan )
2L (GFP, Amp )
Miniprep de clones portant CsgEFG et RcnR. Digestion du plasmide avec EcoRI pour vérifier l'insertion de la part.
Le journal local "VIVA" nous a interviewés. Ils se sont intéressés à notre projet, à l'équipe et à l'organisation du concours iGEM.
Friday
Miniprep using the QuickPure kit of the previous 6 iGEM parts.
Digestion with :
S + P : 18A, 2M, 5L
X + P : 22M, 2L, 24E
Electrophoresis of the digested plasmids versus the non digested.
All the strains had the correct plasmid : they were plated on LB + amp medium.
Miniprep of clones with Csg AB. Digestion of plasmid with EcoRI. Send to GATC for sequencing.
