Team:KIT-Kyoto/matsunami

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8月8日（月）

松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	(Tm-5)°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

下記の組成に従って試薬をまぜた。
右に示したプログラムで反応を行った。

＊<プライマーの塩基配列>
・DIAP2
F primer:GCTTCTCGAGACGGAGCTGGGCATGGAGCT
Tm値　69゜C
R primer:GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA
Tm値　66.4゜C
増幅サイズ　　約1514 bp

・API2-MALT1
F primer:GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT Tm値　57.8゜C
R　primer:GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA
Tm値　56.5゜C
増幅サイズ　　約3131 bp

8月9日（火）

松浪、横井川

【目的】
PCR産物の確認
【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

【目的】
pUAST溶液の形質転換
【実験操作】
↓pUAST　1 µlとコンピテントセルを混合した。
↓これを氷上で15min放置した。
↓43°Cで30sec温め、氷上で10min放置した。
↓これをLBプレートに塗り37°Cでincubateした。

8月10日（水）

松浪

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	(Tm-5)°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

下記の組成に従って試薬をまぜた。
右に示したプログラムで反応を行った。

【目的】
大腸菌の培養

【実験操作】
↓ガスバーナーで加熱滅菌したつまようじでLB（amp+）プレートから生えてきた大腸菌のコロニーをついた。
↓ついた先端を2個のLB培地（amp+）2 mlに攪拌した。
↓pUASTとコンピテントセルの混合物を10 µl、100 µlをそれぞれまいた。

8月11日（木）

松浪

【目的】
pUAST flag vectorの大量精製

【実験操作】
↓培養液1.5 mLを、15000 rpm、5min、4°Cの条件で遠心した。この間にglucose solution、5M K-acetate pH 4.8を氷上で冷やした。
↓上清を廃棄しglucose solution　100 µl加えて攪拌し、沈殿物を溶解した。
↓0.2N NaOH 1% SDS 200 µlを加えてよく混ぜ、氷上に5min放置した。
↓5M K-acetate pH 4.8 150 µlを加えてよく混ぜ、氷上に5min放置した。
↓15000 rpm、10min、4°Cの条件で遠心した。
↓上清を新しいチューブに移し、isopropanolを等量入れ攪拌し3min静置した。
↓15000 rpm、10min、25°Cの条件で遠心した。
↓上清を廃棄し70% EtOH 200 µlを加えて軽く攪拌し3min静置した。その後、15000 rpm、10min、25°Cの条件で再び遠心した。
↓上清を廃棄し乾燥させてRnase in TE 20 µlを加えた。
　
【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

8月12日（金）

松浪、横井川

【目的】
pUAST flag vectorの大量精製

【実験操作】
↓培養した大腸菌をオートクレーブした遠心管で4000 G、10min、25°Cの条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。
↓R3 with RNase A4 を4 mL加えて、攪拌し完全に溶解させた。
↓L7を4 mLを加え丁寧に混合し5min室温で静置した。
↓N3を4 mL加えてすぐに混ぜた。これを12000 G、10min、25°Cの条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。
↓事前にEQ1 10 mLを加えて平衡化していたカラムに上清をLoadし、上清が流れ落ちるのを待った。このとき、一部をチューブに保存した。
↓Wash Buffer (W8) 10 mLを加えて洗浄した。これを2回行った。
↓Elution buffer (E4)を5 mL加えてDNAを溶出させた。追加で、E4 2 mLをLoadし、別のチューブに保存した。
↓isopropanol 3.5 mLを加えて混合し、これを15000 G、40min、4°Cの条件で遠心し、上清を捨てた。
↓70%　EtOH 3mLを加えて再懸濁し、15000G、5min、4℃の条件で再び遠心し、上清を捨てた。
↓Air-dryで乾燥させ200 µlでのTEに溶かした。

↓次にこの溶液のDNA濃度測定を行った。
↓ddH₂O 100 µlおよび、精製したDNA溶液を100倍希釈した溶液を準備した。
↓ddH₂O 100 µlでゼロ補正を行い、サンプル1、5の吸光度を測定した。結果を以下に示す（表1）。
表1、サンプル1、5の吸光度の値
サンプル1

0.189

0.208

0.192

0.190

0.191

　平均は0.194であった。
これより、サンプル1のDNA濃度は0.970 µg/µlであった。

サンプル5

0.282

0.276

0.278

0.269

平均は0.275でった。
これより、サンプル5のDNA濃度は1.37 µg/µlであった。

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

8月15日（月）

松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認

【実験操作】
・API2-MALT1

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	58.9°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

・DIAP2

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	53°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

下記の組成に従って試薬をまぜた。
右に示したプログラムで反応を行った。

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

8月16日（火）

松浪

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認

【実験操作】
・API2-MALT1

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	53°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

・DIAP2

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	58.9°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

8月17日（水）

松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認

【実験操作】
・API2-MALT1

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	53.5°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

・DIAP2

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	50.5°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

【目的】
　PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

　　８/23(火)

松浪

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！
　（1）PCR反応液の調製
       <1本分あたり>
　　　KOD+ polymelase　　　　　　　　 1 µL
       10 x Buffer　                          2 µL　　　　　　
       dNTP(2.0 µM)                         5 µL
       F primer(10 µM)                    1.5 µL
       R primer(10 µM)                    1.5 µL
       Templet DNA                          1 µL
       milliQ                                   33 µL

       上記の分量を混合した。
　　　
　　　           　　　

　 (2)PCR反応条件
　　　<1>×1　　　Pre-denature 　 94 ℃　　　2 min

       <2>×35　　Denature        　 94 ℃　　 15 sec
　　　　　　　　　　
　　　　　　　・DIAP2
                       Annealing        50.5 ℃　　   30 sec
                       Extension          68 ℃       1 min 40 sec
               ・API2-MALT1
　　　　　　　　　　 Annealing              ℃　　   30 sec
                       Extension          68 ℃       3 min

       <3>                                   72℃　　　　10 min
       <4>                                     4℃        ∞


        上記の条件でPCRを行った。

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

8月24日（水）

松浪

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】
・API2-MALT1

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	51.5°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

鋳型DNAを10、100倍希釈後、上記の条件でPCRを行った。

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

8月25日（木）

松浪

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！
・API2-MALT1

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	51.5°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

    ・DIAP2
　（1）PCR反応液の調製()
       <1本分あたり>
　　　KOD+ polymelase　　　　　　　　 1 µL
       10 x Buffer　                          2 µL　　　　　　
       dNTP(2.0 µM)                         5 µL
       F primer(10 µM)                    1.5 µL
       R primer(10 µM)                    1.5 µL
       Templet DNA                          1 µL
       milliQ                                   33 µL

       上記の分量を混合した。
　　　           　　　

　 (2)PCR反応条件
　　　<1>×1　　　Pre-denature 　 94 ℃　　　2 min

       <2>×35　　Denature        　 94 ℃　　 15 sec
                       Annealing        50.5 ℃　　   30 sec
                       Extension          68 ℃       1 min 40 sec

       <3>                                  　4℃        ∞


        上記の条件でPCRを行った。

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

9月12日（月）
松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！
　（1）PCR反応液の調製
       <1本分あたり>
　　　KOD+ polymelase　　　　　　　　 1 µL
       10 x Buffer　                          2 µL　　　　　　
       dNTP(2.0 µM)                         5 µL
       F primer(10 µM)                    1.5 µL
       R primer(10 µM)                    1.5 µL
       Templet DNA                          1 µL
       milliQ                                   33 µL

       上記の分量を混合した。
　　　
　　　＊<プライマーの塩基配列>
　　　　　・DIAP2
              F primer  :                                                             Tm値
                 GCTTCTCGATTGACGGAGCTGGGCATGGAGCT　　　 62 ℃
　　　　　　 R primer :
                 GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA           66.4 ℃
　　　　　　増幅サイズ　　約1514 bp

           　　　

　 (2)PCR反応条件
　　　<1>×1　　　Pre-denature 　 94 ℃　　　2 min

       <2>×35　　Denature        　 94 ℃　　 15 sec
                       Annealing        50.5 ℃　　   30 sec
                       Extension          68 ℃       1 min 40 sec

       <3>                                  　4℃        ∞


        上記の条件でPCRを行った。

9月13日（火）

松浪、横井川

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

9月14日（水）

松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】

PCR条件

10 µM Primer F	0.4 µl
10 µM Primer R	0.4 µl
Template DNA	1 µl
10 x Ex Taq Buffer	2 µl
Takara Ex Taq	0.1 µl
2.0 mM dNTPs	2 µl
ddH₂O	14.1 µl
	total 20 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	30sec	37 Cycle
Anneling	51.5°C	30sec
Extension	72°C	1kb/min
+Extension	72°C	10min
End	4°C	keep

＊プライマーの塩基配列
・API2-MALT1
F primer
GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT
Tm値
57.8 ゜C
R primer
GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA
Tm値
56.5 ゜C
増幅サイズ　　約3131 bp
　

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

9月15日（木）

松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験方法】
以下の条件でPCRを行った。

PCR条件

10 µM Primer F	1.5 µl
10 µM Primer R	1.5 µl
Template DNA	1 µl
10 x PCR Buffer for KOD Plus	5 µl
dNTPs	5 µl
MgSO₄	2 µl
ddH₂O	33 µl
KOD Plus	1 µl
	total 50 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	15sec	35 Cycle
Anneling	50.5°C	30sec
Extension	68°C	1min 40sec
End	4°C	keep

各サンプルを回収し、-20゜Cで保存した。　　　
　　　＊<プライマーの塩基配列>
　　　　　・DIAP2
              F primer  :                                                             Tm値
                 GCTTCTCGATTGACGGAGCTGGGCATGGAGCT　　　 62 ℃
　　　　　　 R primer :
                 GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA           66.4 ℃
　　　　　　増幅サイズ　　約1514 bp

           　　　

　
【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】

PCR反応液	2 µl
ddH₂O	8 µl
6 x loading dye	2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

【目的】
PCR産物の制限酵素処理

【実験操作】
↓PCR産物を400 µlまでddH₂Oで薄めた。
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした。
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。
↓水層のみを新しいチューブに移した。
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした。
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。
↓水層のみを新しいチューブに移した。
↓3M CH₃COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した。
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した。
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた。
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した。
↓上澄みを捨て、乾燥させた。
↓ddH₂Oを44 µl加えてvoltexした。

下記の組成に従って反応液を調整した。

cDNA

PCR産物 in ddH₂O	44 µl
10 x H Buffer	5 µl
XhoⅠ	1 µl
	total 50 µl

vector

PUAST-flag vector(500 ng/µl)	10 µl
ddH₂O	34 µl
10 x H Buffer	5 µl
XhoⅠ	1 µl
	total 50 µl

37°Cで20時間静置した。
9月16日（金）

松浪、横井川

【目的】
PCR産物の制限酵素処理

【実験操作】
↓PCR産物を400 µlまでddH₂Oで薄めた。
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした。
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。
↓水層のみを新しいチューブに移した。
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした。
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。
↓水層のみを新しいチューブに移した。
↓3M CH₃COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した。
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した。
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた。
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した。
↓上澄みを捨て、乾燥させた。
↓ddH₂Oを44 µl加えてvoltexした。

下記の組成に従って反応液を調整した。

@@ Line 1: / Line 1: @@
 <html>
-<head>
-<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
-<title></title>
-</head>
 <body>
-<p><font color="#000000">あいうえお
-<table style="WIDTH: 298px; HEIGHT: 281px" border="1" cellspacing="0" cellpadding="0">
+月8日（月）<br>
-  <tr>
+<br>
-    <td>　さささ</td>
+松浪、横井川<br>
-    <td>　ささｓｓｓ</td>
+<br>
-    <td>あああああ　</td>
+【目的】<br>
-  </tr>
+cDNA
-  <tr>
+vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
-    <td>　Ｔ<sub>Ｅ</sub></td>
+<br>
-    <td>　5<sup>0μ</sup>Ｌ</td>
+【実験操作】<br>
-    <td>　1000</td>
+<table border="0"><tr><td>
-  </tr>
+<table border="0" width="150px">
-  <tr>
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
-    <td>　</td>
+</table>
-    <td>　</td>
+<table border=1 width="220px">
-    <td>　</td>
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
-  </tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
-  <tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
-    <td>　</td>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-    <td>　</td>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
-    <td>　</td>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-  </tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
-  <tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
-    <td>　</td>
+</table>
-    <td>　</td>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
-    <td>　</td>
+<table border="0" width="100px">
-  </tr>
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
-  <tr>
+</table>
-    <td>　</td>
+<table border=1 width="400px">
-    <td>　</td>
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-    <td>　</td>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
-  </tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>(Tm-5)°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
-  <tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
-    <td>　</td>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-    <td>　</td>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-    <td>　</td>
+</table>
-  </tr>
+</td></tr>
 </table>
-</font></p>
-</body>
-</html>
-<html>
+<BR>
-<head>
-<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
+下記の組成に従って試薬をまぜた。<br>
-<title></title>
+右に示したプログラムで反応を行った。<br>
-</head>
+<br>
-<body>
+＊&lt;プライマーの塩基配列&gt;<br>
-<p>8月8日（月）<br>
+・DIAP2<br>
+F primer:GCTTCTCGAGACGGAGCTGGGCATGGAGCT<br>
+Tm値　69゜C<br>
+R primer:GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA<br>
+Tm値　66.4゜C<br>
+増幅サイズ　　約1514 bp<br>
+<br>
+・API2-MALT1<br>
+F primer:GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT
+Tm値　57.8゜C<br>
+R　primer:GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA<br>
+Tm値　56.5゜C<br>
+増幅サイズ　　約3131 bp<br>
+<br>
+<br>
+月9日（火）<br>
 <br>
 松浪、横井川<br>
 <br>
 【目的】<br>
-　cDNA
+PCR産物の確認<br>
+【実験操作】<br>
+<table border="1" width="200px">
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+</table>
+<br>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+<br>
+<br>
+【目的】<br>
+pUAST溶液の形質転換<br>
+【実験操作】<br>
+↓pUAST　1 µlとコンピテントセルを混合した。<br>
+↓これを氷上で15min放置した。<br>
+↓43°Cで30sec温め、氷上で10min放置した。<br>
+↓これをLBプレートに塗り37°Cでincubateした。<br>
+<br>
+月10日（水）<br>
+<br>
+松浪<br>
+<br>
+【目的】<br>
+cDNA
 vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
 <br>
 【実験操作】<br>
+<table border="0"><tr><td>
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>(Tm-5)°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
+<BR>
+下記の組成に従って試薬をまぜた。<br>
+右に示したプログラムで反応を行った。<br>
+<br>
+【目的】<br>
+大腸菌の培養<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+↓ガスバーナーで加熱滅菌したつまようじでLB（amp+）プレートから生えてきた大腸菌のコロニーをついた。<br>
+↓ついた先端を2個のLB培地（amp+）2 mlに攪拌した。<br>
+↓pUASTとコンピテントセルの混合物を10 µl、100 µlをそれぞれまいた。<br>
+<br>
+月11日（木）<br>
+<br>
+松浪<br>
+<br>
+【目的】<br>
+pUAST flag
+vectorの大量精製<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+↓培養液1.5 mLを、15000 rpm、5min、4°Cの条件で遠心した。この間にglucose solution、5M K-acetate pH 4.8を氷上で冷やした。<br>
+↓上清を廃棄しglucose solution　100 µl加えて攪拌し、沈殿物を溶解した。<br>
+↓0.2N NaOH 1% SDS 200 µlを加えてよく混ぜ、氷上に5min放置した。<br>
+↓5M K-acetate pH 4.8 150 µlを加えてよく混ぜ、氷上に5min放置した。<br>
+↓15000 rpm、10min、4°Cの条件で遠心した。<br>
+↓上清を新しいチューブに移し、isopropanolを等量入れ攪拌し3min静置した。<br>
+↓15000 rpm、10min、25°Cの条件で遠心した。<br>
+↓上清を廃棄し70% EtOH 200 µlを加えて軽く攪拌し3min静置した。その後、15000 rpm、10min、25°Cの条件で再び遠心した。<br>
+↓上清を廃棄し乾燥させてRnase in TE 20 µlを加えた。<br>
+　<br>
+【目的】<br>
+PCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+<table border="1" width="200px">
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+</table>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+<br>
+月12日（金）<br>
+<br>
+松浪、横井川<br>
+<br>
+【目的】<br>
+pUAST flag
+vectorの大量精製<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+↓培養した大腸菌をオートクレーブした遠心管で4000 G、10min、25°Cの条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+↓R3 with RNase A4 を4 mL加えて、攪拌し完全に溶解させた。<br>
+↓L7を4 mLを加え丁寧に混合し5min室温で静置した。<br>
+↓N3を4 mL加えてすぐに混ぜた。これを12000 G、10min、25°Cの条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+↓事前にEQ1 10 mLを加えて平衡化していたカラムに上清をLoadし、上清が流れ落ちるのを待った。このとき、一部をチューブに保存した。<br>
+↓Wash Buffer (W8) 10 mLを加えて洗浄した。これを2回行った。<br>
+↓Elution buffer (E4)を5 mL加えてDNAを溶出させた。追加で、E4 2 mLをLoadし、別のチューブに保存した。<br>
+↓isopropanol 3.5 mLを加えて混合し、これを15000 G、40min、4°Cの条件で遠心し、上清を捨てた。<br>
+↓70%　EtOH 3mLを加えて再懸濁し、15000G、5min、4℃の条件で再び遠心し、上清を捨てた。<br>
+↓Air-dryで乾燥させ200 µlでのTEに溶かした。<br>
+<br>
+↓次にこの溶液のDNA濃度測定を行った。<br>
+↓ddH<sub>2</sub>O 100 µlおよび、精製したDNA溶液を100倍希釈した溶液を準備した。<br>
+↓ddH<sub>2</sub>O 100 µlでゼロ補正を行い、サンプル1、5の吸光度を測定した。結果を以下に示す（表1）。<br>
+表1、サンプル1、5の吸光度の値<br>
+サンプル1<br>
+<table border=1 width="500px">
+<tr><td width="100px" align=rjght>0.189</td><td width="100px" align=rjght>0.208</td><td width="100px" align=rjght>0.192</td><td width="100px" align=rjght>0.190</td><td width="100px" align=rjght>0.191</td></tr><table>
+<br>
+　平均は0.194であった。<br>
+これより、サンプル1のDNA濃度は0.970 µg/µlであった。<br>
+<br>
+サンプル5<br>
+<table border=1 width="500px">
+<tr><td width="100px" align=rjght>0.282</td><td width="100px" align=rjght>0.276</td><td width="100px" align=rjght>0.278</td><td width="100px" align=rjght>0.269</td><td width="100px" align=rjght>0.269</td></tr><table>
+<br>
+平均は0.275でった。<br>
+これより、サンプル5のDNA濃度は1.37 µg/µlであった。<br>
+<br>
+【目的】<br>
+PCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+<table border="1" width="200px">
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+</table>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+<br>
+<br>
+月15日（月）<br>
+<br>
+松浪、横井川<br>
+<br>
+【目的】<br>
+cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+・API2-MALT1<br>
+<table border="0"><tr><td>
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>58.9°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
+<br>
+・DIAP2<br>
+<table border="0"><tr><td>
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>53°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
+<BR>
+下記の組成に従って試薬をまぜた。<br>
+右に示したプログラムで反応を行った。<br>
+<br>
+【目的】<br>
+PCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+<table border="1" width="200px">
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+</table>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+<br>
+<br>
+月16日（火）<br>
+<br>
+松浪<br>
+<br>
+【目的】<br>
+cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+・API2-MALT1<br>
+<table border="0"><tr><td>
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>53°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
+・DIAP2<br>
+<table border="0"><tr><td>
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>58.9°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
+<br>
+【目的】<br>
+PCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+<table border="1" width="200px">
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+</table>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+<br>
+<br>
+<br>
+月17日（水）<br>
+<br>
+松浪、横井川<br>
+<br>
+<br>
+【目的】<br>
+cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+・API2-MALT1<br>
+<table border="0"><tr><td>
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>53.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
+・DIAP2<br>
+<table border="0"><tr><td>
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>50.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
+【目的】<br>
+　PCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+<table border="1" width="200px">
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+</table>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+<br>
+８/23(火)<br>
+<br>
+松浪<br>
+<br>
+【目的】<br>
+cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
+<br>
+【実験操作】<font color=red>←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！</font><br>
 　（1）PCR反応液の調製<br>
 &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
 &lt;1本分あたり&gt;<br>
-　　　Takara&nbsp;Ex&nbsp;Taq　　　　　　　　　　0.1
+　　　KOD+ polymelase　　　　　　　 　&nbsp; 1
-&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10 x
-x Ex Taq Buffer　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Buffer　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L　　　　　　<br>
-&micro;L　　　　　　<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; dNTP(2.0
-dNTP(2.0 &micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;5
+&micro;L<br>
-&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;F
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;F primer(10
-primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-.4
+.5 &micro;L<br>
-&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; R primer(10
-R primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-.4
+.5
-&micro;L&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
 Templet
 DNA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L<br>
-&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;14.1
+milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;33
 &micro;L<br>
 &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
@@ Line 90: / Line 552: @@
 上記の分量を混合した。<br>
 　　　<br>
-　　　＊&lt;プライマーの塩基配列&gt;<br>
+　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-　　　　　①DIAP2<br>
-&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-F
-primer&nbsp;&nbsp;:&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-Tm値<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-GCTTCTCGAGACGGAGCTGGGCATGGAGCT　　　　　69
-℃<br>
-　　　　　　 R primer&nbsp;
-:<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-.4
-℃<br>
-　　　　　　増幅サイズ　　約1514
-bp<br>
-<br>
-&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-②API2-MALT1<br>
-&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-F
-primer&nbsp;&nbsp;:&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-Tm値<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-.8
-℃<br>
-&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-R
-primer<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-.5
-℃<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-増幅サイズ　　約3131
-bp<br>
 　　　&nbsp;<br>
 &nbsp;<br>
+　 (2)PCR反応条件<br>
-(2)PCR反応条件<br>
+　　　&lt;1&gt;×1　　　Pre-denature&nbsp; 　 94
-　　　&lt;1&gt;×1　　　Pre-denature&nbsp;
+℃　　　2 min<br>
-℃　　　2
-min<br>
-<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-&lt;2&gt;×37　　Denature&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-℃　　&nbsp; 15
-sec<br>
 <br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&lt;2&gt;×35　　Denature&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 　 94 ℃　　&nbsp;
+sec<br>
+　　　　　　　　　　<br>
+　　　　　　　・DIAP2<br>
 &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-(DIAP2)<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;50.5 ℃　　&nbsp;&nbsp; 30
-Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-.9
-℃　　&nbsp;&nbsp; 30
-sec<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 72
-℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-min
 sec<br>
 &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-(API2-MALT1)<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;68
-.5
+℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 1 min 40
-℃　　&nbsp;&nbsp;
+sec<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;・API2-MALT1<br>
+Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;℃　　&nbsp;&nbsp;
-sec<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 72
-℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-min&nbsp;
 sec<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;68
+℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;3
+min<br>
 <br>
-<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&lt;3&gt;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+℃　　　　10 min<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&lt;4&gt;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;4℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+∞<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
 上記の条件でPCRを行った。<br>
 <br>
+【目的】<br>
+PCR産物の確認<br>
 <br>
+【実験操作】<br>
+<table border="1" width="200px">
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+</table>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
 <br>
-月9日（火）<br>
 <br>
-松浪、横井川<br>
+<br>
+月24日（水）<br>
+<br>
+松浪<br>
 <br>
 【目的】<br>
-　PCR産物の確認<br>
+cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
 <br>
+【実験操作】<br>
+・API2-MALT1<br>
+<table border="0"><tr><td>
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>51.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
+鋳型DNAを10、100倍希釈後、上記の条件でPCRを行った。<br>
-【実験操作】<br>&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2 &micro;L<br>
-&nbsp;
-milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-&micro;L<br>
-&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2
-&micro;L<br>
-&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100
-V、30分の条件で電気泳動した。<br>
-　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-<br>
 <br>
 【目的】<br>
-　pUAST溶液の形質転換<br>
+PCR産物の確認<br>
 <br>
 【実験操作】<br>
-　pUAST　1&nbsp;&micro;Lとコンピテントセルを混合した。これを氷上で15分間放置し、43℃で30秒間温め、さらに氷上で10分間放置した。<br>
+<table border="1" width="200px">
-　これをLBプレートに塗り37℃でincubateした。<br>
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+</table>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
 <br>
 <br>
-<br>
+月25日（木）<br>
-月10日（水）<br>
 <br>
 松浪<br>
 <br>
 【目的】<br>
-　cDNA
+cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
-vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
 <br>
-【実験操作】<br>
+【実験操作】<font color=red>←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！</font><br>
-月8日と同様である。<br>
+・API2-MALT1<br>
+<table border="0"><tr><td>
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>51.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
 <br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+・DIAP2<br>
+　（1）PCR反応液の調製()<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&lt;1本分あたり&gt;<br>
+　　　KOD+ polymelase　　　　　　　 　&nbsp; 1
+&micro;L<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10 x
+Buffer　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L　　　　　　<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; dNTP(2.0
+&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;5
+&micro;L<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;F primer(10
+&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.5 &micro;L<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; R primer(10
+&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.5
+&micro;L&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Templet
+DNA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;33
+&micro;L<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+上記の分量を混合した。<br>
+　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+　　　&nbsp;<br>
+&nbsp;<br>
+　 (2)PCR反応条件<br>
+　　　&lt;1&gt;×1　　　Pre-denature&nbsp; 　 94
+℃　　　2 min<br>
 <br>
-【目的】<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-　大腸菌の培養<br>
+&lt;2&gt;×35　　Denature&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 　 94 ℃　　&nbsp;
+sec<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;50.5 ℃　　&nbsp;&nbsp; 30
+sec<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;68
+℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 1 min 40
+sec<br>
 <br>
-【実験操作】<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&lt;3&gt;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-　①ガスバーナーで加熱滅菌したつまようじでLB（amp+）プレートから生えてきた大腸菌のコロニーをついた。<br>
+℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-　②ついた先端を2個のLB培地（amp+）2mLに攪拌した。<br>
+∞<br>
-　③pUASTとコンピテントセルの混合物を10&nbsp;&micro;L、100
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
-&micro;Lをそれぞれまいた。<br>
 <br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+上記の条件でPCRを行った。<br>
 <br>
-月11日（木）<br>
-<br>
-松浪<br>
 <br>
 【目的】<br>
-　pUAST flag
+PCR産物の確認<br>
-vectorの大量精製<br>
 <br>
 【実験操作】<br>
-　①培養液1.5 mLを、15000rpm、5分、4℃の条件で遠心した。この間にglucose
+<table border="1" width="200px">
-solution、5M K-acetate pH 4.8を氷上で冷やした。<br>
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-　②5分後、上清を廃棄しglucose solution　100
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-&micro;L加えて攪拌した。<br>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-　③沈殿物を溶解した後、0.2N NaOH 1% SDS 200
+</table>
-&micro;Lを加えてよく混ぜ、氷上に5分間放置した。<br>
-　④5分後、5M K-acetate pH 4.8 150
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-&micro;Lを加えてよく混ぜ、氷上に5分間放置した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-　⑤5分後、15000rpm、10分、4℃の条件で遠心した。<br>
-　⑥上清を新しいチューブに移し、isopropanolを等量入れ攪拌し3分間静置した。<br>
-　⑦3分後、15000rpm、10分、25℃の条件で遠心した。<br>
-　⑧遠心後、上清を廃棄し70%
-EtOH 200
-&micro;Lを加えて軽く攪拌し3分間静置した。その後、15000rpm、10分、25℃の条件で再び遠心した。<br>
-　⑨遠心後、上清を廃棄し乾燥させてRnase in
-TE 20
-&micro;Lを加えた。<br>
-　<br>
-　この溶液とPCR産物を電気泳動した。<br>
-　操作は8月9日と同様である。<br>
 <br>
 <br>
 <br>
-月12日（金）<br>
+<br>
+<br>
+<br>
+月12日（月）
 <br>
 松浪、横井川<br>
 <br>
 【目的】<br>
-　pUAST
+cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
-flag
-vectorの大量精製<br>
 <br>
-【実験操作】<br>
+【実験操作】<font color=red>←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！</font><br>
-　①培養した大腸菌をオートクレーブした遠心管で4000G、10分、25℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+　（1）PCR反応液の調製<br>
-　②R3
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-with RNase A4 を4 mL加えて、攪拌し完全に溶解させた。<br>
+&lt;1本分あたり&gt;<br>
-　③L7を4
+　　　KOD+ polymelase　　　　　　　 　&nbsp;
-mLを加え丁寧に混合し5分間室温で静置した。<br>
-　④5分後、N3を4
+&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10 x
-mL加えてすぐに混ぜた。これを12000G、10分、25℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+Buffer　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-　⑤事前にEQ1 10
+&micro;L　　　　　　<br>
-mLを加えて平衡化していたカラムに上清をLoadし、上清が流れ落ちるのを待った。このとき、一部をチューブに保存した。<br>
+ &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-　⑥Wash Buffer (W8)
+dNTP(2.0
-mLを加えて洗浄した。これを2回行った。<br>
+&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;5 &micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;F
-　⑦Elution buffer (E4)を5 mL加えてDNAを溶出させた。追加で、E4 2
+primer(10
-mLをLoadし、別のチューブに保存した。<br>
+&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-　⑧isopropanol 3.5
+.5 &micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-mLを加えて混合し、これを15000G、40分、4℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+R primer(10
-　⑨70%　EtOH
+&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-mLを加えて再懸濁し、15000G、5分、4℃の条件で再び遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+.5
-　⑩Air-dryで乾燥させ200
+&micro;L&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
-&micro;LでのTEに溶かした。<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Templet
+DNA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;33
+&micro;L<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+上記の分量を混合した。<br>
+　　　<br>
+　　　＊&lt;プライマーの塩基配列&gt;<br>
+　　　　　・DIAP2<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+F
+primer&nbsp;&nbsp;:&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Tm値<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+GCTTCTCGATTGACGGAGCTGGGCATGGAGCT　　　 62 ℃<br>
+　　　　　　 R primer&nbsp;
+:<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.4 ℃<br>
+　　　　　　増幅サイズ　　約1514
+bp<br>
 <br>
-　次にこの溶液のDNA濃度測定を行った。<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-　①milliQ 100
+　　　&nbsp;<br>
-&micro;Lおよび、精製したDNA溶液を100倍希釈した溶液を準備した。<br>
+&nbsp;<br>
-　②milliQ 100
+　 (2)PCR反応条件<br>
-&micro;Lでゼロ補正を行い、サンプル1、5の吸光度を測定した。結果を以下に示す（表1）。<br>
+　　　&lt;1&gt;×1　　　Pre-denature&nbsp; 　 94
-　　　　　　　　　　　　　　　　表1、サンプル1、5の吸光度の値<br>
+℃　　　2 min<br>
-　<br>
-　サンプル1<br>
-<table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" width="75%">
-  <tr>
-    <td>　0.189</td>
-    <td>　0.208</td>
-    <td>0.192　</td>
-    <td>0.190　</td>
-    <td>0.191　</td>
-  </tr>
-</table>平均は0.194であった。<br>
-これより、サンプル1のDNA濃度は0.970
-&micro;g/&micro;Lであった。<br>
 <br>
-サンプル5<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+&lt;2&gt;×35　　Denature&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 　 94 ℃　　&nbsp;
-<table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" width="75%">
-  <tr>
+sec<br>
-    <td>　0.282</td>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-    <td>0.276　</td>
+Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;50.5 ℃　　&nbsp;&nbsp; 30
-    <td>0.278　</td>
+sec<br>
-    <td>0.269　</td>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-    <td>0.269　</td>
+Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;68
-  </tr>
+℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 1 min 40
-</table>平均は0.275でった。<br>
+sec<br>
-これより、サンプル5のDNA濃度は1.37
-&micro;g/&micro;Lであった。<br>
 <br>
-　次にこれらの溶液について電気泳動を行った。<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&lt;3&gt;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
-　　操作は8月9日と同様である。<br>
+℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+∞<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+上記の条件でPCRを行った。<br>
 <br>
 <br>
-月15日（月）<br>
+<br>
+月13日（火）<br>
 <br>
 松浪、横井川<br>
 <br>
 【目的】<br>
-　cDNA
+PCR産物の確認<br>
-vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
 <br>
 【実験操作】<br>
-月8日と同じであるが、Annealing&nbsp;について以下のように変更した。<br>
+<table border="1" width="200px">
-　DIAP2②　　　　&nbsp;&nbsp;
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-.9℃<br>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-　API2-MALT1②　　　　　53℃<br>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+</table>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
 <br>
-　その後、電気泳動を行った。操作は8月9日と同様である。<br>
 <br>
 <br>
-月16日（火）<br>
+月14日（水）<br>
 <br>
-松浪<br>
+松浪、横井川<br>
 <br>
 【目的】<br>
-　cDNA
+cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
-vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
 <br>
 【実験操作】<br>
-月8日と同じであるが、Annealing&nbsp;について以下のように変更した。<br>
+<table border="0"><tr><td>
-　DIAP2②　　　　&nbsp;&nbsp;
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
-.9℃<br>
+</table>
-　API2-MALT1①、③　　　　　53℃<br>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>51.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
+<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
 <br>
-　その後、電気泳動を行った。操作は8月9日と同様である。<br>
+＊プライマーの塩基配列<br>
+・API2-MALT1<br>
+F primer<br>
+      GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT<br>
+Tm値<br>
+.8 ゜C<br>
+R primer<br>
+      GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA<br>
+Tm値<br>
+.5 ゜C<br>
+増幅サイズ　　約3131 bp<br>
 <br>
 <br>
-月17日（水）<br>
+【目的】<br>
+PCR産物の確認<br>
+<br>
+【実験操作】<br>
+<table border="1" width="200px">
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
+</table>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+<br>
+<br>
+月15日（木）<br>
 <br>
 松浪、横井川<br>
 <br>
+【目的】<br>
+cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
 <br>
+【実験方法】<br>
+以下の条件でPCRを行った。<BR>
+<table border="0"><tr><td>
+<table border="0" width="150px">
+<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="220px">
+<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>1.5 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>1.5 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x PCR Buffer for KOD Plus</td><td align=right>5 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>dNTPs</td><td align=right>5 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>MgSO<sub>4</sub></td><td align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>33 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>KOD Plus</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 50 µl</td></tr>
+</table>
+</td><TD></TD><TD></TD><td>
+<table border="0" width="100px">
+<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="400px">
+<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px" align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>15sec</td><td align=center rowspan=3>35 Cycle</td></tr>
+<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>50.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
+<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>68°C</td><td align=center>1min 40sec</td></tr>
+<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
+</table>
+</td></tr>
+</table>
+<br>
+各サンプルを回収し、-20゜Cで保存した。
+　　　<br>
+　　　＊&lt;プライマーの塩基配列&gt;<br>
+　　　　　・DIAP2<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+F
+primer&nbsp;&nbsp;:&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+Tm値<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+GCTTCTCGATTGACGGAGCTGGGCATGGAGCT　　　 62 ℃<br>
+　　　　　　 R primer&nbsp;
+:<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+.4 ℃<br>
+　　　　　　増幅サイズ　　約1514
+bp<br>
+<br>
+&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+　　　&nbsp;<br>
+&nbsp;<br>
+　 <br>
 【目的】<br>
-　cDNA
+PCR産物の確認<br>
-vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
 <br>
 【実験操作】<br>
-月8日と同じであるが、Annealing&nbsp;について以下のように変更した。<br>
+<table border="1" width="200px">
-　DIAP2②　　　　&nbsp;&nbsp;
+<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-.5℃<br>
+<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-　API2-MALT1③、④　　　　　53.5℃<br>
+</table>
+上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
+EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
 <br>
-　その後、電気泳動を行った。操作は8月9日と同様である。<br>
 <br>
+【目的】<br>
+PCR産物の制限酵素処理<br>
+<br>
+【実験操作】<br>↓PCR産物を400 µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄めた。<BR>
+↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした。<BR>
+↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。<BR>
+↓水層のみを新しいチューブに移した。<BR>
+↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした。<BR>
+↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。<BR>
+↓水層のみを新しいチューブに移した。<BR>
+↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した。<BR>
+↓15000rpm、4°Cで10min遠心した。<BR>
+↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた。<BR>
+↓15000rpm、4°Cで5min遠心した。<BR>
+↓上澄みを捨て、乾燥させた。<BR>
+↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexした。<BR>
+<br>
+下記の組成に従って反応液を調整した。<BR>
+<TABLE border="0"><TR><TD>
+<table border="0">
+<tr><td>cDNA</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="200px">
+<tr><td width"150px" align=center>PCR産物 in ddH<sub>2</sub>O</td><td width"50px" align=right>44 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x H Buffer</td><td align=right>5 µl</td></tr>
+<tr><td align=center><I>Xho</I>Ⅰ</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 50 µl</td></tr>
+</table>
+</TD><TD></TD><TD></TD><TD>
+<table border="0">
+<tr><td>vector</td></tr>
+</table>
+<table border=1 width="250px">
+<tr><td width"200px" align=center>PUAST-flag vector(500 ng/µl)</td><td width"50px" align=right>10 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>34 µl</td></tr>
+<tr><td align=center>10 x H Buffer</td><td align=right>5 µl</td></tr>
+<tr><td align=center><I>Xho</I>Ⅰ</td><td align=right>1 µl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 50 µl</td></tr>
+</table>
+</TD></TR>
+</TABLE>
+°Cで20時間静置した。
+<BR>
+月16日（金）<br>
+<br>
+松浪、横井川<br>
+<br>
+【目的】<br>
+PCR産物の制限酵素処理<br>
+<br>
+【実験操作】<br>↓PCR産物を400 µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄めた。<BR>
+↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした。<BR>
+↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。<BR>
+↓水層のみを新しいチューブに移した。<BR>
+↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした。<BR>
+↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。<BR>
+↓水層のみを新しいチューブに移した。<BR>
+↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した。<BR>
+↓15000rpm、4°Cで10min遠心した。<BR>
+↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた。<BR>
+↓15000rpm、4°Cで5min遠心した。<BR>
+↓上澄みを捨て、乾燥させた。<BR>
+↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexした。<BR>
+<br>
+下記の組成に従って反応液を調整した。<BR>
+<br>
+<br><br>
 <br>
 <br>
@@ Line 376: / Line 1,095: @@
 <br>
 <br>
 <br>
 <br>
 <br>
-　　　</p>
+<br>
 </body>
 </html>