Team:KIT-Kyoto/matsunami

From 2011.igem.org

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<html>
<html>
-
<head>
+
 
-
<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
+
-
<title></title>
+
-
</head>
+
<body>
<body>
-
<p><font color="#000000">あいうえお
 
-
<table style="WIDTH: 298px; HEIGHT: 281px" border="1" cellspacing="0" cellpadding="0">
 
-
  <tr>
 
-
    <td>　さささ</td>
 
-
    <td>　ささｓｓｓ</td>
 
-
    <td>あああああ　</td>
 
-
  </tr>
 
-
  <tr>
 
-
    <td>　Ｔ<sub>Ｅ</sub></td>
 
-
    <td>　5<sup>0μ</sup>Ｌ</td>
 
-
    <td>　1000</td>
 
-
  </tr>
 
-
  <tr>
 
-
    <td>　</td>
 
-
    <td>　</td>
 
-
    <td>　</td>
 
-
  </tr>
 
-
  <tr>
 
-
    <td>　</td>
 
-
    <td>　</td>
 
-
    <td>　</td>
 
-
  </tr>
 
-
  <tr>
 
-
    <td>　</td>
 
-
    <td>　</td>
 
-
    <td>　</td>
 
-
  </tr>
 
-
  <tr>
 
-
    <td>　</td>
 
-
    <td>　</td>
 
-
    <td>　</td>
 
-
  </tr>
 
-
  <tr>
 
-
    <td>　</td>
 
-
    <td>　</td>
 
-
    <td>　</td>
 
-
  </tr>
 
-
</table>
 
-
</font></p>
 
-
</body>
 
-
</html>
 
-
<html>
+
8月8日（月）<br>
-
<head>
+
-
<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
+
-
<title></title>
+
-
</head>
+
-
<body>
+
-
<p>8月8日（月）<br>
+
<br>
<br>
松浪、横井川<br>
松浪、横井川<br>
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA
vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　（1）PCR反応液の調製<br>
+
<table border="0"><tr><td>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="0" width="150px">
-
&lt;1本分あたり&gt;<br>
+
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
-
　　　Takara&nbsp;Ex&nbsp;Taq　　　　　　　　　　0.1  
+
</table>
-
&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border=1 width="220px">
-
10  
+
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
-
x Ex Taq Buffer　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
-
2  
+
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
-
&micro;L　　　　　　<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
dNTP(2.0 &micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
-
2  
+
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;F
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
-
primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
-
0.4
+
</table>
-
&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
</td><TD></TD><TD></TD><td>
-
R primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="0" width="100px">
-
0.4
+
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
-
&micro;L&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
</table>
-
Templet
+
<table border=1 width="400px">
-
DNA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
1  
+
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
-
&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>(Tm-5)°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;14.1
+
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
-
&micro;L<br>
+
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
</table>
-
上記の分量を混合した。<br>
+
</td></tr>
-
　　　<br>
+
</table>
-
　　　＊&lt;プライマーの塩基配列&gt;<br>
+
 
-
　　　　　・DIAP2<br>
+
<BR>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
+
 
-
F
+
下記の組成に従って試薬をまぜた。<br>
-
primer&nbsp;&nbsp;:&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
右に示したプログラムで反応を行った。<br>
-
Tm値<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
GCTTCTCGAGACGGAGCTGGGCATGGAGCT　　　　　69
+
-
℃<br>
+
-
　　　　　　 R primer&nbsp;
+
-
:<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
66.4
+
-
℃<br>
+
-
　　　　　　増幅サイズ　　約1514
+
-
bp<br>
+
<br>
<br>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
+
＊&lt;プライマーの塩基配列&gt;<br>
-
・API2-MALT1<br>
+
・DIAP2<br>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
F primer:GCTTCTCGAGACGGAGCTGGGCATGGAGCT<br>
-
F  
+
Tm値　69゜C<br>
-
primer&nbsp;&nbsp;:&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
R primer:GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA<br>
-
Tm値<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
Tm値　66.4゜C<br>
-
GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
増幅サイズ　　約1514 bp<br>
-
57.8
+
-
℃<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
R  
+
-
primer<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
56.5
+
-
℃<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
増幅サイズ　　約3131
+
-
bp<br>
+
-
　　　&nbsp;<br>
+
-
&nbsp;<br>
+
-
　
+
-
(2)PCR反応条件<br>
+
-
　　　&lt;1&gt;×1　　　Pre-denature&nbsp; 　
+
-
94 ℃　　　2
+
-
min<br>
+
-
<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
&lt;2&gt;×37　　Denature&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
　
+
-
94 ℃　　&nbsp; 15
+
-
sec<br>
+
-
<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
(DIAP2)<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
56.9
+
-
℃　　&nbsp;&nbsp; 30
+
-
sec<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 72
+
-
℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
1
+
-
min
+
-
40
+
-
sec<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
(API2-MALT1)<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
51.5
+
-
℃　　&nbsp;&nbsp;
+
-
30
+
-
sec<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 72
+
-
℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
3
+
-
min&nbsp;
+
-
20
+
-
sec<br>
+
-
<br>
+
-
<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
上記の条件でPCRを行った。<br>
+
<br>
<br>
 +
・API2-MALT1<br>
 +
F primer:GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT
 +
Tm値　57.8゜C<br>
 +
R　primer:GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA<br>
 +
Tm値　56.5゜C<br>
 +
増幅サイズ　　約3131 bp<br>
 +
<br>
<br>
<br>
<br>
 +
8月9日（火）<br>
8月9日（火）<br>
<br>
<br>
Line 170: Line 69:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
 +
 +
【実験操作】<br>
 +
 
 +
<table border="1" width="200px">
 +
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
</table>
 +
 
<br>
<br>
-
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
【実験操作】<br>&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2 &micro;L<br>
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
&nbsp;
+
 
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
8 &micro;L<br>
+
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2
+
-
&micro;L<br>
+
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
<br>
<br>
 +
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　pUAST溶液の形質転換<br>
+
pUAST溶液の形質転換<br>
-
<br>
+
 
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　pUAST　1&nbsp;&micro;Lとコンピテントセルを混合した。<br>
 
-
　↓これを氷上で15分間放置した。<br>
 
-
　↓43℃で30秒間温め、氷上で10分間放置した。<br>
+
↓pUAST　1 µlとコンピテントセルを混合した。<br>
-
　これをLBプレートに塗り37℃でincubateした。<br>
+
↓これを氷上で15min放置した。<br>
-
<br>
+
↓43°Cで30sec温め、氷上で10min放置した。<br>
-
<br>
+
↓これをLBプレートに塗り37°Cでincubateした。<br>
 +
 
<br>
<br>
 +
8月10日（水）<br>
8月10日（水）<br>
<br>
<br>
Line 202: Line 104:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA
vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　8月8日と同様である。<br>
+
<table border="0"><tr><td>
-
<br>
+
<table border="0" width="150px">
 +
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="220px">
 +
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
 +
</table>
 +
</td><TD></TD><TD></TD><td>
 +
<table border="0" width="100px">
 +
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="400px">
 +
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>(Tm-5)°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
 +
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
</table>
 +
</td></tr>
 +
</table>
 +
 
 +
<BR>
 +
 
 +
下記の組成に従って試薬をまぜた。<br>
 +
右に示したプログラムで反応を行った。<br>
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　大腸菌の培養<br>
+
大腸菌の培養<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　ガスバーナーで加熱滅菌したつまようじでLB（amp+）プレートから生えてきた大腸菌のコロニーをついた。<br>
+
↓ガスバーナーで加熱滅菌したつまようじでLB（amp+）プレートから生えてきた大腸菌のコロニーをついた。<br>
-
　↓ついた先端を2個のLB培地（amp+）2mLに攪拌した。<br>
+
↓ついた先端を2個のLB培地（amp+）2 mlに攪拌した。<br>
-
　pUASTとコンピテントセルの混合物を10&nbsp;&micro;L、100
+
↓pUASTとコンピテントセルの混合物を10 µl、100 µlをそれぞれまいた。<br>
-
&micro;Lをそれぞれまいた。<br>
+
 
-
<br>
+
<br>
<br>
 +
8月11日（木）<br>
8月11日（木）<br>
<br>
<br>
Line 224: Line 157:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　pUAST flag  
+
pUAST flag  
vectorの大量精製<br>
vectorの大量精製<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　培養液1.5 mLを、15000rpm、5分、4℃の条件で遠心した。この間にglucose
+
↓培養液1.5 mLを、15000 rpm、5min、4°Cの条件で遠心した。この間にglucose solution、5M K-acetate pH 4.8を氷上で冷やした。<br>
-
solution、5M K-acetate pH 4.8を氷上で冷やした。<br>
+
↓上清を廃棄しglucose solution　100 µl加えて攪拌し、沈殿物を溶解した。<br>
-
　↓5分後、上清を廃棄しglucose solution　100  
+
↓0.2N NaOH 1% SDS 200 µlを加えてよく混ぜ、氷上に5min放置した。<br>
-
&micro;L加えて攪拌した。<br>
+
↓5M K-acetate pH 4.8 150 µlを加えてよく混ぜ、氷上に5min放置した。<br>
-
　↓沈殿物を溶解した後、0.2N NaOH 1% SDS 200  
+
↓15000 rpm、10min、4°Cの条件で遠心した。<br>
-
&micro;Lを加えてよく混ぜ、氷上に5分間放置した。<br>
+
↓上清を新しいチューブに移し、isopropanolを等量入れ攪拌し3min静置した。<br>
-
　↓5分後、5M K-acetate pH 4.8 150  
+
↓15000 rpm、10min、25°Cの条件で遠心した。<br>
-
&micro;Lを加えてよく混ぜ、氷上に5分間放置した。<br>
+
↓上清を廃棄し70% EtOH 200 µlを加えて軽く攪拌し3min静置した。その後、15000 rpm、10min、25°Cの条件で再び遠心した。<br>
-
　↓5分後、15000rpm、10分、4℃の条件で遠心した。<br>
+
↓上清を廃棄し乾燥させてRnase in TE 20 µlを加えた。<br>
-
　↓上清を新しいチューブに移し、isopropanolを等量入れ攪拌し3分間静置した。<br>
+
-
　↓3分後、15000rpm、10分、25℃の条件で遠心した。<br>
+
-
　↓遠心後、上清を廃棄し70%  
+
-
EtOH 200  
+
-
&micro;Lを加えて軽く攪拌し3分間静置した。その後、15000rpm、10分、25℃の条件で再び遠心した。<br>
+
-
　遠心後、上清を廃棄し乾燥させてRnase in  
+
-
TE 20  
+
-
&micro;Lを加えた。<br>
+
　<br>
　<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
-
<br>
+
 
-
<br>
+
8月12日（金）<br>
8月12日（金）<br>
<br>
<br>
Line 269: Line 191:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　pUAST
+
pUAST flag  
-
flag  
+
vectorの大量精製<br>
vectorの大量精製<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　培養した大腸菌をオートクレーブした遠心管で4000G、10分、25℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+
↓培養した大腸菌をオートクレーブした遠心管で4000 G、10min、25°Cの条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
-
　↓R3
+
↓R3 with RNase A4 を4 mL加えて、攪拌し完全に溶解させた。<br>
-
with RNase A4 を4 mL加えて、攪拌し完全に溶解させた。<br>
+
↓L7を4 mLを加え丁寧に混合し5min室温で静置した。<br>
-
　↓L7を4
+
↓N3を4 mL加えてすぐに混ぜた。これを12000 G、10min、25°Cの条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
-
mLを加え丁寧に混合し5分間室温で静置した。<br>
+
↓事前にEQ1 10 mLを加えて平衡化していたカラムに上清をLoadし、上清が流れ落ちるのを待った。このとき、一部をチューブに保存した。<br>
-
　↓5分後、N3を4
+
↓Wash Buffer (W8) 10 mLを加えて洗浄した。これを2回行った。<br>
-
mL加えてすぐに混ぜた。これを12000G、10分、25℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+
↓Elution buffer (E4)を5 mL加えてDNAを溶出させた。追加で、E4 2 mLをLoadし、別のチューブに保存した。<br>
-
　↓事前にEQ1 10  
+
↓isopropanol 3.5 mLを加えて混合し、これを15000 G、40min、4°Cの条件で遠心し、上清を捨てた。<br>
-
mLを加えて平衡化していたカラムに上清をLoadし、上清が流れ落ちるのを待った。このとき、一部をチューブに保存した。<br>
+
↓70%　EtOH 3mLを加えて再懸濁し、15000G、5min、4℃の条件で再び遠心し、上清を捨てた。<br>
-
　↓Wash Buffer (W8)  
+
↓Air-dryで乾燥させ200 µlでのTEに溶かした。<br>
-
10 mLを加えて洗浄した。これを2回行った。<br>
+
<br>
-
　↓Elution buffer (E4)を5 mL加えてDNAを溶出させた。追加で、E4 2  
+
↓次にこの溶液のDNA濃度測定を行った。<br>
-
mLをLoadし、別のチューブに保存した。<br>
+
↓ddH<sub>2</sub>O 100 µlおよび、精製したDNA溶液を100倍希釈した溶液を準備した。<br>
-
　↓isopropanol 3.5  
+
↓ddH<sub>2</sub>O 100 µlでゼロ補正を行い、サンプル1、5の吸光度を測定した。結果を以下に示す（表1）。<br>
-
mLを加えて混合し、これを15000G、40分、4℃の条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+
 
-
　↓70%　EtOH  
+
 
-
3mLを加えて再懸濁し、15000G、5分、4℃の条件で再び遠心し、遠心後上清を捨てた。<br>
+
表1、サンプル1、5の吸光度の値<br>
-
　Air-dryで乾燥させ200  
+
サンプル1<br>
-
&micro;LでのTEに溶かした。<br>
+
<table border=1 width="500px">
 +
<tr><td width="100px" align=rjght>0.189</td><td width="100px" align=rjght>0.208</td><td width="100px" align=rjght>0.192</td><td width="100px" align=rjght>0.190</td><td width="100px" align=rjght>0.191</td></tr><table>
 +
 
<br>
<br>
-
　次にこの溶液のDNA濃度測定を行った。<br>
 
-
　milliQ 100
 
-
&micro;Lおよび、精製したDNA溶液を100倍希釈した溶液を準備した。<br>
 
-
　↓milliQ 100
 
-
&micro;Lでゼロ補正を行い、サンプル1、5の吸光度を測定した。結果を以下に示す（表1）。<br>
 
-
　　　　　　　　　　　　　　　　表1、サンプル1、5の吸光度の値<br>
 
-
　<br>
 
-
　サンプル1<br>
 
-
<table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" width="75%">
+
　平均は0.194であった。<br>
-
  <tr>
+
これより、サンプル1のDNA濃度は0.970 µg/µlであった。<br>
-
    <td>　0.189</td>
+
-
    <td>　0.208</td>
+
-
    <td>0.192　</td>
+
-
    <td>0.190　</td>
+
-
    <td>0.191　</td>
+
-
  </tr>
+
-
</table>平均は0.194であった。<br>
+
-
これより、サンプル1のDNA濃度は0.970  
+
-
&micro;g/&micro;Lであった。<br>
+
<br>
<br>
サンプル5<br>
サンプル5<br>
 +
<table border=1 width="500px">
 +
<tr><td width="100px" align=rjght>0.282</td><td width="100px" align=rjght>0.276</td><td width="100px" align=rjght>0.278</td><td width="100px" align=rjght>0.269</td><td width="100px" align=rjght>0.269</td></tr><table>
 +
 +
<br>
 +
 +
平均は0.275でった。<br>
 +
これより、サンプル5のDNA濃度は1.37 µg/µlであった。<br>
-
<table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" width="75%">
 
-
  <tr>
 
-
    <td>　0.282</td>
 
-
    <td>0.276　</td>
 
-
    <td>0.278　</td>
 
-
    <td>0.269　</td>
 
-
    <td>0.269　</td>
 
-
  </tr>
 
-
</table>平均は0.275でった。<br>
 
-
これより、サンプル5のDNA濃度は1.37
 
-
&micro;g/&micro;Lであった。<br>
 
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
-
【実験操作】<br>
+
【実験操作】<br>  
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
Line 351: Line 251:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
-
vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
+
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　8月8日と同じであるが、Annealing&nbsp;について以下のように変更した。<br>
+
・API2-MALT1<br>
-
　DIAP2&nbsp;&nbsp;  
+
<table border="0"><tr><td>
-
　　　&nbsp;&nbsp;　　　　
+
<table border="0" width="150px">
-
56.9℃<br>
+
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
-
　API2-MALT1
+
</table>
-
　　　　　53℃<br>
+
<table border=1 width="220px">
 +
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
 +
</table>
 +
</td><TD></TD><TD></TD><td>
 +
<table border="0" width="100px">
 +
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="400px">
 +
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>58.9°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
 +
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
</table>
 +
</td></tr>
 +
</table>
 +
<br>
 +
・DIAP2<br>
 +
<table border="0"><tr><td>
 +
<table border="0" width="150px">
 +
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="220px">
 +
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
 +
</table>
 +
</td><TD></TD><TD></TD><td>
 +
<table border="0" width="100px">
 +
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="400px">
 +
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>53°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
 +
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
</table>
 +
</td></tr>
 +
</table>
 +
 
 +
 
 +
 
 +
<BR>
 +
 
 +
下記の組成に従って試薬をまぜた。<br>
 +
右に示したプログラムで反応を行った。<br>
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
Line 384: Line 341:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
-
vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
+
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　8月8日と同じであるが、Annealing&nbsp;について以下のように変更した。<br>
+
・API2-MALT1<br>
-
　DIAP2&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
+
<table border="0"><tr><td>
-
　　　&nbsp;&nbsp;　　
+
<table border="0" width="150px">
-
　　　　
+
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
-
58.9℃<br>
+
</table>
-
　API2-MALT1&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
+
<table border=1 width="220px">
-
　　　　　53℃<br>
+
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
 +
</table>
 +
</td><TD></TD><TD></TD><td>
 +
<table border="0" width="100px">
 +
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="400px">
 +
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>53°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
 +
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
</table>
 +
</td></tr>
 +
</table>
 +
 
 +
・DIAP2<br>
 +
<table border="0"><tr><td>
 +
<table border="0" width="150px">
 +
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="220px">
 +
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
 +
</table>
 +
</td><TD></TD><TD></TD><td>
 +
<table border="0" width="100px">
 +
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="400px">
 +
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>58.9°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
 +
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
</table>
 +
</td></tr>
 +
</table>
 +
 
 +
 
 +
 
 +
 
 +
 
 +
 
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
Line 420: Line 432:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
-
vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認<br>
+
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　8月8日と同じであるが、Annealing&nbsp;について以下のように変更した。<br>
+
・API2-MALT1<br>
-
　DIAP2　　　　&nbsp;&nbsp;　　
+
<table border="0"><tr><td>
-
　　　　
+
<table border="0" width="150px">
-
50.5℃<br>
+
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
-
　API2-MALT1　　　　　　　
+
</table>
-
53.5℃<br>
+
<table border=1 width="220px">
-
<br>
+
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
 +
</table>
 +
</td><TD></TD><TD></TD><td>
 +
<table border="0" width="100px">
 +
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="400px">
 +
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>53.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
 +
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
</table>
 +
</td></tr>
 +
</table>
 +
 
 +
・DIAP2<br>
 +
<table border="0"><tr><td>
 +
<table border="0" width="150px">
 +
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="220px">
 +
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
 +
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
 +
</table>
 +
</td><TD></TD><TD></TD><td>
 +
<table border="0" width="100px">
 +
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="400px">
 +
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>50.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
 +
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
 +
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
 +
</table>
 +
</td></tr>
 +
</table>
 +
 
 +
 
 +
 
 +
 
【目的】<br>
【目的】<br>
　PCR産物の確認<br>
　PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
-
<br>
 
-
<br>
 
-
<br>
 
-
<br>
 
-
<br>
 
-
　
 
-
<br>
 
-
<br>
 
<br>
<br>
-
　　　</p>
+
　　
-
</body>
+
-
</html>
+
-
 
+
８/23(火)<br>
-
<html>
+
-
<head>
+
-
<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
+
-
<title></title>
+
-
</head>
+
-
<body>
+
-
<p>８/23(火)<br>
+
<br>
<br>
松浪<br>
松浪<br>
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
-
vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
+
<br>
<br>
-
【実験操作】<br>
+
【実験操作】<font color=red>←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！</font><br>
　（1）PCR反応液の調製<br>
　（1）PCR反応液の調製<br>
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
Line 547: Line 594:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
<br>
<br>
Line 568: Line 613:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
-
vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
+
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　（1）PCR反応液の調製<br>
+
・API2-MALT1<br>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="0"><tr><td>
-
&lt;1本分あたり&gt;<br>
+
<table border="0" width="150px">
-
　　　Takara&nbsp;Ex&nbsp;Taq　　　　　　　　　　0.1
+
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
-
&micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10 x Ex Taq
+
<table border=1 width="220px">
-
Buffer　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
-
2 &micro;L　　　　　　<br>
+
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; dNTP(2.0
+
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
-
&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;F  
+
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
-
0.4 &micro;L<br>
+
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; R  
+
</table>
-
primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
</td><TD></TD><TD></TD><td>
-
0.4  
+
<table border="0" width="100px">
-
&micro;L&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
</table>
-
Templet
+
<table border=1 width="400px">
-
DNA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
1 &micro;L<br>
+
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>51.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;14.1  
+
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
-
&micro;L<br>
+
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
</table>
-
上記の分量を混合した。<br>
+
</td></tr>
-
　　　ただし、10倍希釈、100倍希釈したAPI2-MALT1のTemplet DNAを用いた。<br>
+
</table>
-
&nbsp;<br>
+
 
-
　
+
鋳型DNAを10、100倍希釈後、上記の条件でPCRを行った。<br>
-
(2)PCR反応条件<br>
+
-
　　　&lt;1&gt;×1　　　Pre-denature&nbsp; 　 94 ℃　　　2
+
-
min<br>
+
-
<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
&lt;2&gt;×37　　Denature&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 　 94 ℃　　&nbsp;
+
-
15
+
-
sec<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
51.5 ℃　　&nbsp;&nbsp; 30
+
-
sec<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 72
+
-
℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 3 min&nbsp; 20
+
-
sec<br>
+
-
<br>
+
-
<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
上記の条件でPCRを行った。<br>
+
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
<br>
<br>
Line 644: Line 667:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
-
vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
+
<br>
<br>
-
【実験操作】<br>
+
【実験操作】<font color=red>←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！</font><br>
-
　 ・API2-MALT1<br>
+
・API2-MALT1<br>
-
&nbsp;
+
<table border="0"><tr><td>
-
（1）PCR反応液の調製<br>
+
<table border="0" width="150px">
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
-
&lt;1本分あたり&gt;<br>
+
</table>
-
　　　Takara&nbsp;Ex&nbsp;Taq　　　　　　　　　　0.1  
+
<table border=1 width="220px">
-
&micro;L<br>
+
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10 x Ex Taq
+
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
-
Buffer　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
-
2 &micro;L　　　　　　<br>
+
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; dNTP(2.0
+
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
-
&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;F
+
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
-
primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
</table>
-
0.4 &micro;L<br>
+
</td><TD></TD><TD></TD><td>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; R  
+
<table border="0" width="100px">
-
primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
-
0.4  
+
</table>
-
&micro;L&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
<table border=1 width="400px">
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
Templet
+
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
-
DNA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>51.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
-
1 &micro;L<br>
+
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;14.1  
+
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
&micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
</table>
-
上記の分量を混合した。<br>
+
 
-
　　　&nbsp;<br>
+
-
　 (2)PCR反応条件<br>
+
-
　　　&lt;1&gt;×1　　　Pre-denature&nbsp;  
+
-
　 94 ℃　　　2 min<br>
+
-
<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
&lt;2&gt;×37　　Denature&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 　 94 ℃　　&nbsp;
+
-
15
+
-
sec<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
51.5 ℃　　&nbsp;&nbsp; 30
+
-
sec<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 72
+
-
℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 3 min&nbsp; 20
+
-
sec<br>
+
<br>
<br>
&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
Line 754: Line 760:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
<br>
<br>
Line 774: Line 778:
<br>
<br>
-
</p>
 
-
</body>
 
-
</html>
 
-
 
+
9月12日（月）
-
<html>
+
-
<head>
+
-
<meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=shift_jis">
+
-
<title></title>
+
-
</head>
+
-
<body>
+
-
<p>9月12日（月）<br>
+
<br>
<br>
松浪、横井川<br>
松浪、横井川<br>
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
-
vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
+
<br>
<br>
-
【実験操作】<br>
+
【実験操作】<font color=red>←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！</font><br>
　（1）PCR反応液の調製<br>
　（1）PCR反応液の調製<br>
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
Line 871: Line 864:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
<br>
<br>
Line 892: Line 883:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
-
vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
+
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
　（1）PCR反応液の調製<br>
+
<table border="0"><tr><td>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="0" width="150px">
-
&lt;1本分あたり&gt;<br>
+
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
-
　　　Takara&nbsp;Ex&nbsp;Taq　　　　　　　　　　0.1  
+
</table>
-
&micro;L<br>
+
<table border=1 width="220px">
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10 x Ex Taq  
+
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px"  align=right>0.4 µl</td></tr>
-
Buffer　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>0.4 µl</td></tr>
-
2 &micro;L　　　　　　<br>
+
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; dNTP(2.0
+
<tr><td align=center>10 x Ex Taq Buffer</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
+
<tr><td align=center>Takara Ex Taq</td><td align=right>0.1 µl</td></tr>
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td align=center>2.0 mM dNTPs</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;F
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>14.1 µl</td></tr>
-
primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 20 µl</td></tr>
-
0.4 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; R
+
</td><TD></TD><TD></TD><td>
-
primer&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
+
<table border="0" width="100px">
-
0.4
+
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
-
&micro;L&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
</table>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border=1 width="400px">
-
Templet
+
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px"  align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
DNA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;  
+
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>30sec</td><td align=center rowspan=3>37 Cycle</td></tr>
-
1 &micro;L<br>
+
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>51.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>1kb/min</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;14.1
+
<tr><td align=center>+Extension</td><td align=center>72°C</td><td align=center>10min</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
&micro;L<br>
+
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
</table>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
</td></tr>
-
上記の分量を混合した。<br>
+
</table>
-
　　　<br>
+
<br>
-
　　　＊&lt;プライマーの塩基配列&gt;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
＊プライマーの塩基配列<br>
-
　　　　・API2-MALT1<br>
+
・API2-MALT1<br>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
F primer<br>  
-
F
+
      GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT<br>
-
primer&nbsp;&nbsp;:&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
Tm値<br>
 +
      57.8 ゜C<br>  
 +
R primer<br>
 +
      GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA<br>
Tm値<br>
Tm値<br>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
      56.5 ゜C<br>  
-
GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
増幅サイズ　　約3131 bp<br>　  
-
57.8
+
-
℃<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
R
+
-
primer<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
56.5  
+
-
℃<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
増幅サイズ　　約3131 bp<br>
+
-
　　　&nbsp;<br>
+
-
&nbsp;<br>
+
-
　  
+
-
(2)PCR反応条件<br>
+
-
　　　&lt;1&gt;×1　　　Pre-denature&nbsp; 　 94 ℃　　　2
+
-
min<br>
+
-
<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
&lt;2&gt;×37　　Denature&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 　 94 ℃　　&nbsp;
+
-
15
+
-
sec<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
51.5 ℃　　&nbsp;&nbsp; 30
+
-
sec<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 72
+
-
℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 3 min&nbsp; 20
+
-
sec<br>
+
-
<br>
+
-
<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
上記の条件でPCRを行った。<br>
+
-
<br>
+
<br>
<br>
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
<br>
<br>
Line 989: Line 947:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　cDNA
+
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
-
vectorを鋳型としたcDNAの増殖<br>
+
<br>
<br>
-
【実験操作】<br>
+
【実験方法】<br>
-
　（1）PCR反応液の調製<br>
+
以下の条件でPCRを行った。<BR>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="0"><tr><td>
-
&lt;1本分あたり&gt;<br>
+
<table border="0" width="150px">
-
　　　KOD+ polymelase　　　　　　　 　&nbsp;
+
<tr><td align=center>PCR条件</td></tr>
-
1  
+
</table>
-
&micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10 x
+
<table border=1 width="220px">
-
Buffer　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td width="150px" align=center>10 µM Primer F</td><td width="70px" align=right>1.5 µl</td></tr>
-
2 &micro;L　　　　　　<br>
+
<tr><td align=center>10 µM Primer R</td><td align=right>1.5 µl</td></tr>
-
  &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>Template DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr>
-
dNTP(2.0
+
<tr><td align=center>10 x PCR Buffer for KOD Plus</td><td align=right>5 µl</td></tr>
-
&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;5 &micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;F
+
<tr><td align=center>dNTPs</td><td align=right>5 µl</td></tr>
-
primer(10  
+
<tr><td align=center>MgSO<sub>4</sub></td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>33 µl</td></tr>
-
1.5 &micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>KOD Plus</td><td align=right>1 µl</td></tr>
-
R primer(10  
+
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 50 µl</td></tr>
-
&micro;M)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
</table>
-
1.5
+
</td><TD></TD><TD></TD><td>
-
&micro;L&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
<table border="0" width="100px">
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>Cycle条件</td></tr>
-
Templet
+
</table>
-
DNA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border=1 width="400px">
-
1 &micro;L<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td width="100px" align=center>Pre-Denature</td><td width="100px"  align=center>94°C</td><td width="100px" align=center>2min</td></td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;33
+
<tr><td align=center>Denature</td><td align=center>94°C</td><td align=center>15sec</td><td align=center rowspan=3>35 Cycle</td></tr>
-
&micro;L<br>
+
<tr><td align=center>Anneling</td><td align=center>50.5°C</td><td align=center>30sec</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
<tr><td align=center>Extension</td><td align=center>68°C</td><td align=center>1min 40sec</td></tr>
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>End</td><td align=center>4°C</td><td align=center>keep</td><td width="100px">&nbsp;</td></tr>
-
上記の分量を混合した。<br>
+
</table>
 +
</td></tr>
 +
</table>
 +
 
 +
<br>
 +
各サンプルを回収し、-20゜Cで保存した。
　　　<br>
　　　<br>
　　　＊&lt;プライマーの塩基配列&gt;<br>
　　　＊&lt;プライマーの塩基配列&gt;<br>
Line 1,040: Line 1,002:
　　　&nbsp;<br>
　　　&nbsp;<br>
&nbsp;<br>
&nbsp;<br>
-
　 (2)PCR反応条件<br>
+
　 <br>
-
　　　&lt;1&gt;×1　　　Pre-denature&nbsp; 　 94
+
-
℃　　　2 min<br>
+
-
<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
&lt;2&gt;×35　　Denature&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 　 94 ℃　　&nbsp;
+
-
15
+
-
sec<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
Annealing&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;50.5 ℃　　&nbsp;&nbsp; 30
+
-
sec<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
Extension&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;68
+
-
℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 1 min 40
+
-
sec<br>
+
-
<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&lt;3&gt;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
　4℃&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
∞<br>
+
-
&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;<br>
+
-
<br>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
-
上記の条件でPCRを行った。<br>
+
-
<br>
+
-
<br>
+
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の確認<br>
+
PCR産物の確認<br>
<br>
<br>
【実験操作】<br>
【実験操作】<br>
-
&nbsp;&nbsp;PCR反応液　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<table border="1" width="200px">
-
2 &micro;L<br>
+
<tr><td width="140px" align=center>PCR反応液</td><td width="60px" align=right>2 µl</td></tr>
-
&nbsp;
+
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>8 µl</td></tr>
-
milliQ&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;
+
<tr><td align=center>6 x loading dye</td><td align=right>2 µl</td></tr>
-
8 &micro;L<br>
+
</table>
-
&nbsp; 6 x loading dye&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 2  
+
 
-
&micro;L<br>
+
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。<br>
-
&nbsp; 上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100  
+
EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
-
V、30分の条件で電気泳動した。<br>
+
-
　泳動後、EtBr染色を行い、写真を撮った。<br>
+
<br>
<br>
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の制限酵素処理<br>
+
PCR産物の制限酵素処理<br>
-
<br>
+
-
【実験操作】<br>
+
-
　(1)PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）<br>
+
-
　　　PCR産物を400
+
-
&micro;LまでmilliQで薄め、フェノールクロロホルムを400 &micro;L加えて攪拌した。<br>
+
-
　　　↓10000 rpm、3
+
-
min、4℃で遠心後、水層のみを新しいチューブに移した。<br>
+
-
　　　↓クロロホルムを等量加えて攪拌した。<br>
+
-
　　　↓10000 rpm、3
+
-
min、4℃で遠心後、水層のみを新しいチューブに移した。<br>
+
-
　　　↓3 M&nbsp; 酢酸ナトリウム（pH
+
-
5.27）を1/10量加え、イソプロパノールを等量加え、3 min静置した。<br>
+
-
　　　↓14000 rpm、10
+
-
min、4℃で遠心後、上清を捨て70％エタノールを200 &micro;L加えた。<br>
+
-
　　　↓15000 rpm、5
+
-
min、4℃で遠心後、上清を捨て乾燥させた。<br>
+
-
　　　↓乾燥後、milliQ44 &micro;Lを加えて攪拌した。<br>
+
-
　　　この溶液にXhoIを1 &micro;L、10×H
+
-
Bufferを5 &micro;Lを加え、37℃で20時間静置した。<br>
+
-
<br>
+
<br>
<br>
 +
【実験操作】<br>↓PCR産物を400 µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄めた。<BR>
 +
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした。<BR>
 +
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。<BR>
 +
↓水層のみを新しいチューブに移した。<BR>
 +
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした。<BR>
 +
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。<BR>
 +
↓水層のみを新しいチューブに移した。<BR>
 +
↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した。<BR>
 +
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した。<BR>
 +
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた。<BR>
 +
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した。<BR>
 +
↓上澄みを捨て、乾燥させた。<BR>
 +
↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexした。<BR>
<br>
<br>
 +
下記の組成に従って反応液を調整した。<BR>
 +
 +
<TABLE border="0"><TR><TD>
 +
<table border="0">
 +
<tr><td>cDNA</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="200px">
 +
<tr><td width"150px" align=center>PCR産物 in ddH<sub>2</sub>O</td><td width"50px" align=right>44 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 x H Buffer</td><td align=right>5 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center><I>Xho</I>Ⅰ</td><td align=right>1 µl</td></tr>
 +
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 50 µl</td></tr>
 +
</table>
 +
</TD><TD></TD><TD></TD><TD>
 +
<table border="0">
 +
<tr><td>vector</td></tr>
 +
</table>
 +
<table border=1 width="250px">
 +
<tr><td width"200px" align=center>PUAST-flag vector(500 ng/µl)</td><td width"50px" align=right>10 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>34 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center>10 x H Buffer</td><td align=right>5 µl</td></tr>
 +
<tr><td align=center><I>Xho</I>Ⅰ</td><td align=right>1 µl</td></tr>
 +
<tr><td>&nbsp;</td><td align=right>total 50 µl</td></tr>
 +
</table>
 +
</TD></TR>
 +
</TABLE>
 +
 +
 +
37°Cで20時間静置した。
 +
 +
<BR>
 +
9月16日（金）<br>
9月16日（金）<br>
<br>
<br>
Line 1,109: Line 1,070:
<br>
<br>
【目的】<br>
【目的】<br>
-
　PCR産物の制限酵素処理<br>
+
PCR産物の制限酵素処理<br>
<br>
<br>
-
【実験操作】<br>
+
【実験操作】<br>↓PCR産物を400 µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄めた。<BR>
-
　(1)PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）<br>
+
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした。<BR>
-
　　　PCR産物を400
+
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。<BR>
-
&micro;LまでmilliQで薄め、フェノールクロロホルムを400 &micro;L加えて攪拌した。<br>
+
↓水層のみを新しいチューブに移した。<BR>
-
　　　↓10000 rpm、3
+
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした。<BR>
-
min、4℃で遠心後、水層のみを新しいチューブに移した。<br>
+
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。<BR>
-
　　　↓クロロホルムを等量加えて攪拌した。<br>
+
↓水層のみを新しいチューブに移した。<BR>
-
　　　↓10000 rpm、3
+
↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した。<BR>
-
min、4℃で遠心後、水層のみを新しいチューブに移した。<br>
+
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した。<BR>
-
　　　↓3 M&nbsp; 酢酸ナトリウム（pH
+
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた。<BR>
-
5.27）を1/10量加え、イソプロパノールを等量加え、3 min静置した。<br>
+
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した。<BR>
-
　　　↓14000 rpm、10
+
↓上澄みを捨て、乾燥させた。<BR>
-
min、4℃で遠心後、上清を捨て70％エタノールを200 &micro;L加えた。<br>
+
↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexした。<BR>
-
　　　↓15000 rpm、5
+
<br>
-
min、4℃で遠心後、上清を捨て乾燥させた。<br>
+
下記の組成に従って反応液を調整した。<BR>
-
　　　乾燥後、TE44 &micro;Lを加えて攪拌し-20℃で保存した。<br>
+
-
 
+
<br>
<br>
<br><br>
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</body>
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</html>
</html>

Latest revision as of 04:27, 30 September 2011

8月8日（月）

松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】

PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling(Tm-5)°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 

下記の組成に従って試薬をまぜた。
右に示したプログラムで反応を行った。

＊<プライマーの塩基配列>
・DIAP2
F primer:GCTTCTCGAGACGGAGCTGGGCATGGAGCT
Tm値　69゜C
R primer:GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA
Tm値　66.4゜C
増幅サイズ　　約1514 bp

・API2-MALT1
F primer:GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT Tm値　57.8゜C
R　primer:GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA
Tm値　56.5゜C
増幅サイズ　　約3131 bp


8月9日（火）

松浪、横井川

【目的】
PCR産物の確認
【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl

上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。


【目的】
pUAST溶液の形質転換
【実験操作】
↓pUAST　1 µlとコンピテントセルを混合した。
↓これを氷上で15min放置した。
↓43°Cで30sec温め、氷上で10min放置した。
↓これをLBプレートに塗り37°Cでincubateした。

8月10日（水）

松浪

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】
PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling(Tm-5)°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 

下記の組成に従って試薬をまぜた。
右に示したプログラムで反応を行った。

【目的】
大腸菌の培養

【実験操作】
↓ガスバーナーで加熱滅菌したつまようじでLB（amp+）プレートから生えてきた大腸菌のコロニーをついた。
↓ついた先端を2個のLB培地（amp+）2 mlに攪拌した。
↓pUASTとコンピテントセルの混合物を10 µl、100 µlをそれぞれまいた。

8月11日（木）

松浪

【目的】
pUAST flag vectorの大量精製

【実験操作】
↓培養液1.5 mLを、15000 rpm、5min、4°Cの条件で遠心した。この間にglucose solution、5M K-acetate pH 4.8を氷上で冷やした。
↓上清を廃棄しglucose solution　100 µl加えて攪拌し、沈殿物を溶解した。
↓0.2N NaOH 1% SDS 200 µlを加えてよく混ぜ、氷上に5min放置した。
↓5M K-acetate pH 4.8 150 µlを加えてよく混ぜ、氷上に5min放置した。
↓15000 rpm、10min、4°Cの条件で遠心した。
↓上清を新しいチューブに移し、isopropanolを等量入れ攪拌し3min静置した。
↓15000 rpm、10min、25°Cの条件で遠心した。
↓上清を廃棄し70% EtOH 200 µlを加えて軽く攪拌し3min静置した。その後、15000 rpm、10min、25°Cの条件で再び遠心した。
↓上清を廃棄し乾燥させてRnase in TE 20 µlを加えた。
　
【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

8月12日（金）

松浪、横井川

【目的】
pUAST flag vectorの大量精製

【実験操作】
↓培養した大腸菌をオートクレーブした遠心管で4000 G、10min、25°Cの条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。
↓R3 with RNase A4 を4 mL加えて、攪拌し完全に溶解させた。
↓L7を4 mLを加え丁寧に混合し5min室温で静置した。
↓N3を4 mL加えてすぐに混ぜた。これを12000 G、10min、25°Cの条件で遠心し、遠心後上清を捨てた。
↓事前にEQ1 10 mLを加えて平衡化していたカラムに上清をLoadし、上清が流れ落ちるのを待った。このとき、一部をチューブに保存した。
↓Wash Buffer (W8) 10 mLを加えて洗浄した。これを2回行った。
↓Elution buffer (E4)を5 mL加えてDNAを溶出させた。追加で、E4 2 mLをLoadし、別のチューブに保存した。
↓isopropanol 3.5 mLを加えて混合し、これを15000 G、40min、4°Cの条件で遠心し、上清を捨てた。
↓70%　EtOH 3mLを加えて再懸濁し、15000G、5min、4℃の条件で再び遠心し、上清を捨てた。
↓Air-dryで乾燥させ200 µlでのTEに溶かした。

↓次にこの溶液のDNA濃度測定を行った。
↓ddH2O 100 µlおよび、精製したDNA溶液を100倍希釈した溶液を準備した。
↓ddH2O 100 µlでゼロ補正を行い、サンプル1、5の吸光度を測定した。結果を以下に示す（表1）。
表1、サンプル1、5の吸光度の値
サンプル1
0.1890.2080.1920.1900.191

　平均は0.194であった。
これより、サンプル1のDNA濃度は0.970 µg/µlであった。

サンプル5
0.2820.2760.2780.2690.269

平均は0.275でった。
これより、サンプル5のDNA濃度は1.37 µg/µlであった。

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。


8月15日（月）

松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認

【実験操作】
・API2-MALT1
PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling58.9°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 

・DIAP2
PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling53°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 

下記の組成に従って試薬をまぜた。
右に示したプログラムで反応を行った。

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。


8月16日（火）

松浪

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認

【実験操作】
・API2-MALT1
PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling53°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 
・DIAP2
PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling58.9°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。



8月17日（水）

松浪、横井川


【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖とPCR産物の確認

【実験操作】
・API2-MALT1
PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling53.5°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 
・DIAP2
PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling50.5°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 
【目的】
　PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。

　　 ８/23(火)

松浪

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！
　（1）PCR反応液の調製
       <1本分あたり>
　　　KOD+ polymelase　　　　　　　 　  1 µL
       10 x Buffer　                          2 µL　　　　　　
       dNTP(2.0 µM)                         5 µL
       F primer(10 µM)                    1.5 µL
       R primer(10 µM)                    1.5 µL      
       Templet DNA                          1 µL
       milliQ                                   33 µL
       
       上記の分量を混合した。
　　　
　　　           　　　 
 
　 (2)PCR反応条件
　　　<1>×1　　　Pre-denature  　 94 ℃　　　2 min

       <2>×35　　Denature        　 94 ℃　　  15 sec
　　　　　　　　　　
　　　　　　　・DIAP2
                       Annealing        50.5 ℃　　   30 sec
                       Extension          68 ℃       1 min 40 sec
               ・API2-MALT1
　　　　　　　　　　 Annealing              ℃　　   30 sec
                       Extension          68 ℃       3 min


       <3>                                   72℃　　　　10 min
       <4>                                     4℃        ∞
                       

        上記の条件でPCRを行った。

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。



8月24日（水）

松浪

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】
・API2-MALT1
PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling51.5°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 
鋳型DNAを10、100倍希釈後、上記の条件でPCRを行った。

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。


8月25日（木）

松浪

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！
・API2-MALT1
PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling51.5°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 

    ・DIAP2
　（1）PCR反応液の調製()
       <1本分あたり>
　　　KOD+ polymelase　　　　　　　 　  1 µL
       10 x Buffer　                          2 µL　　　　　　
       dNTP(2.0 µM)                         5 µL
       F primer(10 µM)                    1.5 µL
       R primer(10 µM)                    1.5 µL      
       Templet DNA                          1 µL
       milliQ                                   33 µL
       
       上記の分量を混合した。
　　　           　　　 
 
　 (2)PCR反応条件
　　　<1>×1　　　Pre-denature  　 94 ℃　　　2 min

       <2>×35　　Denature        　 94 ℃　　  15 sec
                       Annealing        50.5 ℃　　   30 sec
                       Extension          68 ℃       1 min 40 sec

       <3>                                  　4℃        ∞
                       

        上記の条件でPCRを行った。


【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。






9月12日（月）
松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】←ぷろとこるのテーブルをコピペする！！
　（1）PCR反応液の調製
       <1本分あたり>
　　　KOD+ polymelase　　　　　　　 　  1 µL
       10 x Buffer　                          2 µL　　　　　　
       dNTP(2.0 µM)                         5 µL
       F primer(10 µM)                    1.5 µL
       R primer(10 µM)                    1.5 µL      
       Templet DNA                          1 µL
       milliQ                                   33 µL
       
       上記の分量を混合した。
　　　
　　　＊<プライマーの塩基配列>
　　　　　・DIAP2
              F primer  :                                                             Tm値
                 GCTTCTCGATTGACGGAGCTGGGCATGGAGCT　　　 62 ℃
　　　　　　 R primer  :
                 GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA           66.4 ℃
　　　　　　増幅サイズ　　約1514 bp

           　　　 
 
　 (2)PCR反応条件
　　　<1>×1　　　Pre-denature  　 94 ℃　　　2 min

       <2>×35　　Denature        　 94 ℃　　  15 sec
                       Annealing        50.5 ℃　　   30 sec
                       Extension          68 ℃       1 min 40 sec

       <3>                                  　4℃        ∞
                       

        上記の条件でPCRを行った。



9月13日（火）

松浪、横井川

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。



9月14日（水）

松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験操作】
PCR条件
10 µM Primer F0.4 µl
10 µM Primer R0.4 µl
Template DNA1 µl
10 x Ex Taq Buffer2 µl
Takara Ex Taq0.1 µl
2.0 mM dNTPs2 µl
ddH2O14.1 µl
 total 20 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C30sec37 Cycle
Anneling51.5°C30sec
Extension72°C1kb/min
+Extension72°C10min 
End4°Ckeep 

＊プライマーの塩基配列
・API2-MALT1
F primer
GCCGCTCGAGAACATAGTAGAAAACAGCAT
Tm値
57.8 ゜C
R primer
GCCGGCTAGCTCATTTTTCAGAAATTCTGA
Tm値
56.5 ゜C
増幅サイズ　　約3131 bp
　

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。


9月15日（木）

松浪、横井川

【目的】
cDNA vectorを鋳型としたcDNAの増殖

【実験方法】
以下の条件でPCRを行った。
PCR条件
10 µM Primer F1.5 µl
10 µM Primer R1.5 µl
Template DNA1 µl
10 x PCR Buffer for KOD Plus5 µl
dNTPs5 µl
MgSO42 µl
ddH2O33 µl
KOD Plus1 µl
 total 50 µl
Cycle条件
Pre-Denature94°C2min 
Denature94°C15sec35 Cycle
Anneling50.5°C30sec
Extension68°C1min 40sec
End4°Ckeep 

各サンプルを回収し、-20゜Cで保存した。 　　　
　　　＊<プライマーの塩基配列>
　　　　　・DIAP2
              F primer  :                                                             Tm値
                 GCTTCTCGATTGACGGAGCTGGGCATGGAGCT　　　 62 ℃
　　　　　　 R primer  :
                 GCCGTCTAGATCACGAAAGGAACGTGCGCA           66.4 ℃
　　　　　　増幅サイズ　　約1514 bp

           　　　 
 
　
【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
PCR反応液2 µl
ddH2O8 µl
6 x loading dye2 µl
上記の溶液を混合し、この溶液を1%アガロースゲルで100 V、30minの条件で電気泳動した。
EtBr染色を行い、写真を撮った。


【目的】
PCR産物の制限酵素処理

【実験操作】
↓PCR産物を400 µlまでddH2Oで薄めた。
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした。
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。
↓水層のみを新しいチューブに移した。
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした。
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。
↓水層のみを新しいチューブに移した。
↓3M CH3COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した。
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した。
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた。
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した。
↓上澄みを捨て、乾燥させた。
↓ddH2Oを44 µl加えてvoltexした。

下記の組成に従って反応液を調整した。
cDNA
PCR産物 in ddH2O44 µl
10 x H Buffer5 µl
XhoⅠ1 µl
 total 50 µl
vector
PUAST-flag vector(500 ng/µl)10 µl
ddH2O34 µl
10 x H Buffer5 µl
XhoⅠ1 µl
 total 50 µl
37°Cで20時間静置した。
9月16日（金）

松浪、横井川

【目的】
PCR産物の制限酵素処理

【実験操作】
↓PCR産物を400 µlまでddH2Oで薄めた。
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした。
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。
↓水層のみを新しいチューブに移した。
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした。
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した。
↓水層のみを新しいチューブに移した。
↓3M CH3COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した。
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した。
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた。
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した。
↓上澄みを捨て、乾燥させた。
↓ddH2Oを44 µl加えてvoltexした。

下記の組成に従って反応液を調整した。













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