Team:KIT-Kyoto/nakagawa9月

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↓50 Vで60分間電気泳動する<BR>
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↓EtBrでゲルを40分間染色する<BR>
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↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 µl)のBuffer QGを加える<BR>
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↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認する<BR>
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↓ゲル100 mgに対して、当量(100 µl)の2-プロパノールを加え、混ぜる<BR>
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↓カラムにサンプルをのせる<BR>
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↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てる<BR>
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↓500 µlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かす<BR>
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↓750 µlのwash Buffer PEをカラムに加える<BR>
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↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた<BR>
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↓そのうち5 µlを20倍希釈し、濃度測定をする<BR>
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<a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用した<BR>
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↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくった<BR>
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<tr><td width="130px" align=center>1 kbp or 100bp マーカー</td><td width="100px"  align=right>3 ml</td></tr>
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<tr><td align=center>★DNAサンプル入力</td><td align=right>★入力</td></tr>
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↓50 Vで60分間電気泳動した<BR>
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↓EtBrでゲルを40分間染色した<BR>
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↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した<BR>
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↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだした<BR>
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↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量った<BR>
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↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 µl)のBuffer QGを加えた<BR>
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↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かした<BR>
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↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認した<BR>
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↓ゲル100 mgに対して、当量(100 µl)の2-プロパノールを加え、混ぜた<BR>
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↓カラムにサンプルをのせた<BR>
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↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てた<BR>
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↓500 µlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かした<BR>
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↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた<BR>
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↓750 µlのwash Buffer PEをカラムに加えた<BR>
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GFPのフレームシフトが懸念されたのでその不安材料をのぞくために新たなプライマーを

Revision as of 11:29, 26 September 2011

9/1
(目的)
ベクターのゲル抽出、GFP改良版のPCR
(方法)
<a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する
↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる
↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせる

<tr><td>
1 kbp or 100bp マーカー3 ml
★DNAサンプル入力★入力
Lording Dyi7 ml


↓50 Vで60分間電気泳動した
↓EtBrでゲルを40分間染色した
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した
↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだした
↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量った
↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 µl)のBuffer QGを加えた
↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かした
↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認した
↓ゲル100 mgに対して、当量(100 µl)の2-プロパノールを加え、混ぜた
↓カラムにサンプルをのせた
↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てた
↓500 µlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かした
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた
↓750 µlのwash Buffer PEをカラムに加えた
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた
↓10,000 rpmで1分間遠心した
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた
↓37 µlのMilliQを加えた
↓10,000 rpmで1分間遠心した
↓そのうち5 µlを20倍希釈し、濃度測定をした
<a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用した
↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくった
↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせた

<tr><td>
1 kbp or 100bp マーカー3 ml
★DNAサンプル入力★入力
Lording Dyi7 ml


↓50 Vで60分間電気泳動した
↓EtBrでゲルを40分間染色した
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した
↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだした
↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量った
↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 µl)のBuffer QGを加えた
↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かした
↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認した
↓ゲル100 mgに対して、当量(100 µl)の2-プロパノールを加え、混ぜた
↓カラムにサンプルをのせた
↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てた
↓500 µlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かした
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた
↓750 µlのwash Buffer PEをカラムに加えた
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた
↓10,000 rpmで1分間遠心した
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた
↓37 µlのMilliQを加えた
↓10,000 rpmで1分間遠心した
↓そのうち5 µlを20倍希釈し、濃度測定をした

GFPのフレームシフトが懸念されたのでその不安材料をのぞくために新たなプライマーを

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