Team:KIT-Kyoto/yokoigawa

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Revision as of 06:25, 26 September 2011

8/29(月)

武田、横井川

【目的】
PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理（一回目：Xho I）

【実験操作】
PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）
↓PCR産物を400 µlまでddH₂Oで薄めた
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓3M CH₃COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した
↓上澄みを捨て、乾燥させた
↓ddH₂Oを44 µl加えてvoltexした
※保存する場合 ↓-20°Cで保存した

制限酵素処理(Xho I)
下記の組成に従って反応液を調整した

cDNA

PCR産物 in ddH₂O	44 µl
10 x H Buffer	5 µl
XhoⅠ	1 µl
	total 50 µl

vector

PUAST-flag vector(500 ng/µl)	10 µl
ddH₂O	34 µl
10 x H Buffer	5 µl
XhoⅠ	1 µl
	total 50 µl

37°Cで20時間静置した
8/30(火)
武田、横井川

【目的】
PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理（二回目：Xho I)
【実験操作】
PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）
↓PCR産物を400 µlまでddH₂Oで薄めた
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓3M CH₃COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した
↓上澄みを捨て、乾燥させた
↓ddH₂Oを44 µl加えてvoltexした
※保存する場合 ↓-20°Cで保存する

制限酵素処理(Xba I)

下記の組成に従って反応液を調整する

DIAP2

PCR産物 in ddH₂O	44 µl
10 x M Buffer	5 µl
XbaⅠ	1 µl
	total 50 µl

vector

PUAST-flag vector(500 ng/µl)	10 μl
ddH₂O	34 µl
10 x H Buffer	5 µl
XhoⅠ	1 µl
	total 50 µl

37°Cで20時間静置する
8/31(水)
武田、横井川
【目的】
制限酵素処理したPCR産物・vectorのゲル抽出

【実験操作】
ゲルからのDNA抽出
QIAquick Gel Extraction Kitを使用する
↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくった
↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせた

1 kbpマーカー	5 µl
DIAP2 or PUAST-flag vector	50 µl
Lording Dyi	10 µl

↓50 Vで60分間電気泳動した
↓EtBrでゲルを10分間染色した
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した
↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだした
↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量った
↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 µl)のBuffer QGを加えた
↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かした
↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認した
↓ゲル100 mgに対して、当量(100 µl)の2-プロパノールを加え、混ぜた
↓カラムにサンプルをのせた
↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てた
↓500 µlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かした
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた
↓750 µlのwash Buffer PEをカラムに加えた
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた
↓10,000 rpmで1分間遠心した
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた
↓37 µlのMilliQを加えた
↓10,000 rpmで1分間遠心した
↓そのうち5 µlを20倍希釈し、濃度測定をした

【結果】
pUAST-flag vectorは精製でき、濃度は45.0375 ng/µlであった。
DIAP2はゲル抽出でバンドが見られなかった。

9/1(木)
武田

【目的】
DIAP2のポリメラーゼ連鎖反応

【実験操作】
下記の組成に従って試薬をまぜる
右に示したプログラムで反応を行う

PCR条件

10 µM Primer F	1.5 µl
10 µM Primer R	1.5 µl
Template DNA	1 µl
10 x PCR Buffer	5 µl
dNTPs	5 µl
MgSO₄	2 µl or 4 µl
ddH₂O	33 µl or 31 µl
KOD⁺ polymelase	1 µl
	total 50 µl

Cycle条件

Pre-Denature	94°C	2min
Denature	94°C	15sec	35 Cyle
Anneling	50.5°C	30sec
Extension	68°C	100sec
End	4°C	keep

【目的】
PCR産物の確認

【実験操作】
ゲル電気泳動

ゲル1枚当たりの組成

SeaKem^RGTG^R-agar	0.2 g
1 x TAE	20 ml

↓上記の組成に従い、試薬を三角フラスコで混ぜてレンジで加熱し、専用容器に入れて固めた
↓制限酵素処理した反応液50 μlに対して6 x loading dye を10 μl加えた
↓サンプルとDNA maker をコーム穴に入れた
↓サンプルをセット後、50 V 60minで電気泳動した
↓電気泳動後、EtBrで10minゲルを染色した
↓染色後、MilliQでゲルを数回洗ってプレートにのせた
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した

9/5(月)
横井川
【目的】
PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理（一回目：Xho I）

【実験操作】
PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）
↓PCR産物を400 µlまでddH₂Oで薄めた
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した
↓水層のみを新しいチューブに移した
↓3M CH₃COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した
↓15000rpm、4°Cで10min遠心した
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた
↓15000rpm、4°Cで5min遠心した
↓上澄みを捨て、乾燥させた
↓ddH₂Oを44 µl加えてvoltexする

制限酵素処理(Xho I)
下記の組成に従って反応液を調整する

cDNA

PCR産物 in ddH₂O	44 μl
10 x H Buffer	5 μl
XhoⅠ	1 μl
	total 50 μl

vector

PUAST-flag vector(500 ng/μl)	10 μl
ddH₂O	34 μl
10 x H Buffer	5 μl
XhoⅠ	1 μl
	total 50 μl

37°Cで20時間静置する

9/6(火)
横井川

【目的】
PCR産物とpUAST-flag vectorの制限酵素処理(二回目：Xba I)

【実験操作】
PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）
↓PCR産物を400 µlまでddH₂Oで薄める
↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexする
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心する
↓水層のみを新しいチューブに移す
↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexする
↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心する
↓水層のみを新しいチューブに移す
↓3M CH₃COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置する
↓15000rpm、4°Cで10min遠心する
↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加える
↓15000rpm、4°Cで5min遠心する
↓上澄みを捨て、乾燥させる
↓ddH₂Oを44 µl加えてvoltexする
※保存する場合 ↓-20°Cで保存する

制限酵素処理(Xba I)
下記の組成に従って反応液を調整する

DIAP2

PCR産物 in ddH₂O	44 μl
10 x M Buffer	5 μl
XbaⅠ	1 μl
	total 50 μl

37°Cで20時間静置する

9/7(水)
横井川
【目的】
制限酵素処理したPCR産物・vectorのゲル抽出

【実験操作】
ゲルからのDNA抽出

QIAquick Gel Extraction Kitを使用する
↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる
↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせる

1 kbp or 100bp マーカー	3 ml
DIAP2	50 ml
Lording Dyi	10 ml

↓50 Vで60分間電気泳動する
↓EtBrでゲルを10分間染色する
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する

【結果】
バンドが確認できなかったためゲル抽出を行う事が出来なかった。

9/17（土)
【目的】
PCR産物の制限酵素処理(二回目：Xba I)

【実験操作】
制限酵素処理(Xba I)
下記の組成に従って反応液を調整する

DIAP2

PCR産物 in ddH₂O	44 μl
10 x M Buffer	5 μl
XbaⅠ	1 μl
	total 50 μl

37°Cで20時間静置する

9/18(日)
横井川
LB培地

bacto tryptone	10 g
bacto yeast evtract	5 g
NaCl	10 g

↓LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れる
↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かす
↓三角フラスコに分注し、アルミ箔で二重にフタをして
↓121°Cで20分オートクレーブ滅菌する

【目的】
制限酵素処理したPCR産物のゲル抽出

【実験操作】
ゲルからのDNA抽出

QIAquick Gel Extraction Kitを使用する
↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる
↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせる

1 kbp or 100bp マーカー	3 ml
DIAP2	50 ml
Lording Dyi	10 ml

↓50 Vで60分間電気泳動する
↓EtBrでゲルを10分間染色する
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する

【結果】
バンドが確認できなかったためゲル抽出を行う事が出来なかった。

9/20（火）
【目的】
DIAP2のPCR産物の確認

【実験操作】
ゲル電気泳動

ゲル1枚当たりの組成

SeaKem^RGTG^R-agar	0.2 g
1 x TAE	20 ml

↓上記の組成に従い、試薬を三角フラスコで混ぜてレンジで加熱し、専用容器に入れて固める
↓制限酵素処理した反応液50 μlに対して6 x loading dye を10 μl加える
↓サンプルとDNA maker をコーム穴に入れる
↓サンプルをセット後、50 V 60minで電気泳動する
↓電気泳動後、EtBrで10minゲルを染色する
↓染色後、MilliQでゲルを数回洗ってプレートにのせる
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する

【目的】
MLFバンドを切り出し、そのゲル片からDNAを抽出・精製する。

【実験方法】
ゲルからのDNA抽出
QIAquick Gel Extraction Kitを使用する
↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる
↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせる

1 kbp or 100bp マーカー	3 ml
MLF	50 ml
Lording Dyi	7 ml

↓50 Vで60分間電気泳動する
↓EtBrでゲルを40分間染色する
↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する
↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだす
↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量る
↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 μl)のBuffer QGを加える
↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かす
↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認する
↓ゲル100 mgに対して、当量(100 μl)の2-プロパノールを加え、混ぜる
↓カラムにサンプルをのせる
↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てる
↓500 μlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かす
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てる
↓750 μlのwash Buffer PEをカラムに加える
↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てる
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえる
↓10,000 rpmで1分間遠心する
↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえる
↓37 μlのMilliQを加える
↓10,000 rpmで1分間遠心する
↓そのうち5 μlを20倍希釈し、濃度測定をする

【結果】
濃度は70 ng/µlだった。

【目的】
MLFのライゲーション産物の増殖
【実験方法】
トランスフォーメーション
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 µlのコンピテント細胞を分注した
↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した
↓DNAをチューブに3 µl加えて、氷上で30分間冷やした
↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた
↓90 µlのSOC培地を加えた
↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した
↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。
↓37゜Cで一晩インキュベートした。

9/21（水）
LBプレート作成

LB培地
bacto-agar	15 g/l

↓LB培地を作製する
↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌する
↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌する
↓65°C程度に冷めたら、必要であれば抗生物質を加える
↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注する
↓水平な所に置いて固まらせる

【目的】
pSB1C3 vectorとMLFのライゲーション
【実験方法】

【目的】
MLFのライゲーション産物の増殖
【実験方法】
トランスフォーメーション
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 µlのコンピテント細胞を分注した
↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した
↓DNAをチューブに3 µl加えて、氷上で30分間冷やした
↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた
↓60 µlのSOC培地を加えた
↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した
↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。
↓37゜Cで一晩インキュベートした。

9/22（木）
【目的】
pSB1C3 vectorとMLF、pSB1C3 vectorとGFPのライゲーション

【実験方法】

【目的】
MLFおよびGFPのライゲーション産物の増殖
【実験方法】
トランスフォーメーション
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍した
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに30 µlのコンピテント細胞を分注した
↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻した
↓DNAをチューブに3 µl加えて、氷上で30分間冷やした
↓42°Cで45秒間熱ショックを与えた
↓60 µlのSOC培地を加えた
↓37°Cで1時間、振りながら回復培養した
↓LBプレート(+chloramphenicol)にまいた。
↓37゜Cで一晩インキュベートした。

@@ Line 39: / Line 39: @@
 </table>
 <table border="1" width="200">
-<tr><td width?150px? align="center">PCR産物 in ddH<sub>2</sub>O</td><td width?50px? align="right">44 μl</td></tr>
+<tr><td width?150px? align="center">PCR産物 in ddH<sub>2</sub>O</td><td width?50px? align="right">44 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">10 x H Buffer</td><td align="right">5 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">10 x H Buffer</td><td align="right">5 µl</td></tr>
-<tr><td align="center"><i>Xho</i>Ⅰ</td><td align="right">1 μl</td></tr>
+<tr><td align="center"><i>Xho</i>Ⅰ</td><td align="right">1 µl</td></tr>
-<tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 μl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 µl</td></tr>
 </table>
 </td><td></td><td></td><td>
@@ Line 49: / Line 49: @@
 </table>
 <table border="1" width="250">
-<tr><td width?200px? align="center">PUAST-flag vector(500 ng/μl)</td><td width?50px? align="right">10 μl</td></tr>
+<tr><td width?200px? align="center">PUAST-flag vector(500 ng/µl)</td><td width?50px? align="right">10 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">ddH<sub>2</sub>O</td><td align="right">34 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">ddH<sub>2</sub>O</td><td align="right">34 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">10 x H Buffer</td><td align="right">5 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">10 x H Buffer</td><td align="right">5 µl</td></tr>
-<tr><td align="center"><i>Xho</i>Ⅰ</td><td align="right">1 μl</td></tr>
+<tr><td align="center"><i>Xho</i>Ⅰ</td><td align="right">1 µl</td></tr>
-<tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 μl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 µl</td></tr>
 </table>
 </td></tr>
@@ Line 72: / Line 72: @@
 【実験操作】<br>
 PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）<br>
-↓PCR産物を400 &micro;lまでddH<sub>2</sub>Oで薄める<br>
+↓PCR産物を400 µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄めた<br>
-↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 &micro;l加えてvoltexする<br>
+↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした<br>
-↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心する<br>
+↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した<br>
-↓水層のみを新しいチューブに移す<br>
+↓水層のみを新しいチューブに移した<br>
-↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexする<br>
+↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした<br>
-↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心する<br>
+↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した<br>
-↓水層のみを新しいチューブに移す<br>
+↓水層のみを新しいチューブに移した<br>
-↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置する<br>
+↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した<br>
-↓15000rpm、4°Cで10min遠心する<br>
+↓15000rpm、4°Cで10min遠心した<br>
-↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 &micro;l加える<br>
+↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 &micro;l加えた<br>
-↓15000rpm、4°Cで5min遠心する<br>
+↓15000rpm、4°Cで5min遠心した<br>
-↓上澄みを捨て、乾燥させる<br>
+↓上澄みを捨て、乾燥させた<br>
-↓ddH<sub>2</sub>Oを44 &micro;l加えてvoltexする<br>
+↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexした<br>
 ※保存する場合 ↓-20°Cで保存する <br>
 <br>
@@ Line 96: / Line 96: @@
 </table>
 <table border="1" width="200">
-<tr><td width?150px? align="center">PCR産物 in ddH<sub>2</sub>O</td><td width?50px? align="right">44 μl</td></tr>
+<tr><td width?150px? align="center">PCR産物 in ddH<sub>2</sub>O</td><td width?50px? align="right">44 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">10 x M Buffer</td><td align="right">5 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">10 x M Buffer</td><td align="right">5 µl</td></tr>
-<tr><td align="center"><i>Xba</i>Ⅰ</td><td align="right">1 μl</td></tr>
+<tr><td align="center"><i>Xba</i>Ⅰ</td><td align="right">1 µl</td></tr>
-<tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 μl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 µl</td></tr>
 </table>
@@ Line 105: / Line 105: @@
 </table>
 <table border="1" width="250">
-<tr><td width?200px? align="center">PUAST-flag vector(500 ng/μl)</td><td width?50px? align="right">10 μl</td></tr>
+<tr><td width?200px? align="center">PUAST-flag vector(500 ng/µl)</td><td width?50px? align="right">10 μl</td></tr>
-<tr><td align="center">ddH<sub>2</sub>O</td><td align="right">34 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">ddH<sub>2</sub>O</td><td align="right">34 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">10 x H Buffer</td><td align="right">5 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">10 x H Buffer</td><td align="right">5 µl</td></tr>
-<tr><td align="center"><i>Xho</i>Ⅰ</td><td align="right">1 μl</td></tr>
+<tr><td align="center"><i>Xho</i>Ⅰ</td><td align="right">1 µl</td></tr>
-<tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 μl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 µl</td></tr>
 </table></td></tr></table>37°Cで20時間静置する <br>
@@ Line 122: / Line 122: @@
 <a herf="http://www.qiagen.com/products/dnacleanup/gelpcrsicleanupsystems/qiaquickgelextractionkit.aspx">QIAquick Gel Extraction Kit</a>を使用する<br>
-↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくる<br>
+↓1 x TAEに溶かしたアガロースゲルをつくった<br>
-↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせる<br>
+↓DNAとLording Dyeをまぜたものとマーカーをゲルにのせた<br>
 <tr><td><table border="1" width="230">
-<tr><td width="130" align="center">1 kbpマーカー</td><td width="100"  align="right">5 ml</td></tr>
+<tr><td width="130" align="center">1 kbpマーカー</td><td width="100"  align="right">5 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">DIAP2 or PUAST-flag vector</td><td align="right">50 ml</td></tr>
+<tr><td align="center">DIAP2 or PUAST-flag vector</td><td align="right">50 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">Lording Dyi</td><td align="right">10 ml</td></tr>
+<tr><td align="center">Lording Dyi</td><td align="right">10 µl</td></tr>
 </table>
-↓50 Vで60分間電気泳動する<br>
+↓50 Vで60分間電気泳動した<br>
-↓EtBrでゲルを10分間染色する<br>
+↓EtBrでゲルを10分間染色した<br>
-↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br>
+↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した<br>
-↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだす<br>
+↓清潔で鋭利な手術用メスでゲルからDNA断片を切りだした<br>
-↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量る<br>
+↓1.5 mlチューブ中のゲルスライスの重さを量った<br>
-↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 μl)のBuffer QGを加える<br>
+↓ゲル100 mgに対して、3倍量(300 µl)のBuffer QGを加えた<br>
-↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かす<br>
+↓42-50°Cで10分間放置し、ゲルを完全に溶かした<br>
-↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認する<br>
+↓ゲルが完全に溶けたら、溶液が黄色であることを確認した<br>
-↓ゲル100 mgに対して、当量(100 μl)の2-プロパノールを加え、混ぜる<br>
+↓ゲル100 mgに対して、当量(100 µl)の2-プロパノールを加え、混ぜた<br>
-↓カラムにサンプルをのせる<br>
+↓カラムにサンプルをのせた<br>
-↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てる<br>
+↓10,000 rpmで1分間遠心し、抽出物を捨てた<br>
-↓500 μlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かす<br>
+↓500 µlのBuffer QGをカラムに加え、残りのゲルを溶かした<br>
-↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てる<br>
+↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた<br>
-↓750 μlのwash Buffer PEをカラムに加える<br>
+↓750 µlのwash Buffer PEをカラムに加えた<br>
-↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てる<br>
+↓10,000 rpmで1分間遠心し、ろ液を捨てた<br>
-↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえる<br>
+↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた<br>
-↓10,000 rpmで1分間遠心する<br>
+↓10,000 rpmで1分間遠心した<br>
-↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえる<br>
+↓カラムを新しい1.5 mlチューブに移しかえた<br>
-↓37 μlのMilliQを加える<br>
+↓37 µlのMilliQを加えた<br>
-↓10,000 rpmで1分間遠心する<br>
+↓10,000 rpmで1分間遠心した<br>
-↓そのうち5 μlを20倍希釈し、濃度測定をする<br>
+↓そのうち5 µlを20倍希釈し、濃度測定をした<br>
 <BR>
 <BR>
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 </table>
 <table border="1" width="220">
-<tr><td width="150" align="center">10 μM Primer F</td><td width="70"  align="right">1.5 μl</td></tr>
+<tr><td width="150" align="center">10 µM Primer F</td><td width="70"  align="right">1.5 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">10 μM Primer R</td><td align="right">1.5 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">10 µM Primer R</td><td align="right">1.5 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">Template DNA</td><td align="right">1 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">Template DNA</td><td align="right">1 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">10 x PCR Buffer</td><td align="right">5 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">10 x PCR Buffer</td><td align="right">5 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">dNTPs</td><td align="right">5 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">dNTPs</td><td align="right">5 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">MgSO<sub>4</sub></td><td align="right">2 μl or 4 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">MgSO<sub>4</sub></td><td align="right">2 µl or 4 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">ddH<sub>2</sub>O</td><td align="right">33 μl or 31 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">ddH<sub>2</sub>O</td><td align="right">33 µl or 31 µl</td></tr>
-<tr><td align="center">KOD<sup>+</sup> polymelase</td><td align="right">1 μl</td></tr>
+<tr><td align="center">KOD<sup>+</sup> polymelase</td><td align="right">1 µl</td></tr>
-<tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 μl</td></tr>
+<tr><td>&nbsp;</td><td align="right">total 50 µl</td></tr>
 </table>
 </td><td></td><td></td><td>
@@ Line 218: / Line 218: @@
 <br>
-↓上記の組成に従い、試薬を三角フラスコで混ぜてレンジで加熱し、専用容器に入れて固める<br>
+↓上記の組成に従い、試薬を三角フラスコで混ぜてレンジで加熱し、専用容器に入れて固めた<br>
-↓制限酵素処理した反応液50 μlに対して6 x loading dye を10 μl加える<br>
+↓制限酵素処理した反応液50 μlに対して6 x loading dye を10 μl加えた<br>
-↓サンプルとDNA maker をコーム穴に入れる<br>
+↓サンプルとDNA maker をコーム穴に入れた<br>
-↓サンプルをセット後、50 V 60minで電気泳動する<br>
+↓サンプルをセット後、50 V 60minで電気泳動した<br>
-↓電気泳動後、EtBrで10minゲルを染色する<br>
+↓電気泳動後、EtBrで10minゲルを染色した<br>
-↓染色後、MilliQでゲルを数回洗ってプレートにのせる<br>
+↓染色後、MilliQでゲルを数回洗ってプレートにのせた<br>
-↓UVを照射してDNAのバンドを可視化する<br>
+↓UVを照射してDNAのバンドを可視化した<br>
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 【実験操作】<br>
 PCR産物の精製（フェノールクロロホルム処理・エタノール沈殿）<br>
-↓PCR産物を400 &micro;lまでddH<sub>2</sub>Oで薄める<br>
+↓PCR産物を400 µlまでddH<sub>2</sub>Oで薄めた<br>
-↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 &micro;l加えてvoltexする<br>
+↓phenol-choloroform(φOH/CIAA)を400 µl加えてvoltexした<br>
-↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心する<br>
+↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した<br>
-↓水層のみを新しいチューブに移す<br>
+↓水層のみを新しいチューブに移した<br>
-↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexする<br>
+↓choloroform(CIAA)を等量加えてvoltexした<br>
-↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心する<br>
+↓10000rpm、4°Cで2～3min遠心した<br>
-↓水層のみを新しいチューブに移す<br>
+↓水層のみを新しいチューブに移した<br>
-↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置する<br>
+↓3M CH<sub>3</sub>COONa(pH 5.27)を1/10量、100% ethanolを3倍量加えて、2～3min静置した<br>
-↓15000rpm、4°Cで10min遠心する<br>
+↓15000rpm、4°Cで10min遠心した<br>
-↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 &micro;l加える<br>
+↓上澄みを捨て、70% ethanol(EtOH)を200 µl加えた<br>
-↓15000rpm、4°Cで5min遠心する<br>
+↓15000rpm、4°Cで5min遠心した<br>
-↓上澄みを捨て、乾燥させる<br>
+↓上澄みを捨て、乾燥させた<br>
-↓ddH<sub>2</sub>Oを44 &micro;l加えてvoltexする<br>
+↓ddH<sub>2</sub>Oを44 µl加えてvoltexする<br>
-※保存する場合 ↓-20°Cで保存する <br>
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