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Team:Lyon-INSA-ENS/Realisation/Week3Fr
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Latest revision as of 20:04, 21 September 2011
Semaine 3
Du Lundi le 27 juin au Vendredi 1er Juillet 2011
Lundi
Une autre PCR est lancée pour collecter plus d'ADN (Echec).
Culture des mauvaises souches pour les transformations...(Echec : la souche avait déjà un plasmide).
Précipitation alcoolique des produits de PCR des semaines précédentes.
Mardi
Culture des cellules NM522 pour des transformations ultérieures et culture de bactéries Curli pour extraction.
Ligation des produits de PCR dans pGem-T easy vector pour en faire des parts standards. Transformation dans la souche NM522 des produits de ligation. Selection sur boîtes d'ampicilline, d'X-Gal, d'IPTG. Seul CsgAB n'a pas été transformé ce jour-là.
Mercredi
Miniprep, digestion et électrophorèse du plasmide Curli.
Sélection des colonies blanches sur la boîte pour les parts RcnR and CsgEFG. Culture liquide pour miniprep.
Transformation dans NM522 de la part CsgAB.
Jeudi
Transformation chimique au CaCl2 de certains "iGEM kit distribution DNA" :
Plate 1 :
18A (constitutive promoter, Amp )
2M (RBS fort, Amp )
5L (RBS faible, Amp )
22M ( RBS+YFP, Amp)
Plate 2 :
24E (YFP, Amp + Kan )
2L (GFP, Amp )
Miniprep de clones portant CsgEFG et RcnR. Digestion du plasmide avec EcoRI pour vérifier l'insertion de la part.
Le journal local "VIVA" nous a interviewés. Ils se sont intéressés à notre projet, à l'équipe et à l'organisation du concours iGEM.
Vendredi
Miniprep des 6 parts iGEM précédentes en utilisant le kit QuickPure.
Digestion avec :
S + P : 18A, 2M, 5L
X + P : 22M, 2L, 24E
Électrophorèse plasmides digérés et des non-digérés.
Toutes les souches n'ont pas le bon plasmide : les souches ont été étalées sur un milieu LB + amp.
Miniprep des clones avec CSgAB. Digestion des plasmides avec ECoRI. Envoi à GATC pour séquençage.
