Team:KIT-Kyoto/nakagawa

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Revision as of 13:37, 18 September 2011

8/22
（目的）
iGEMからのGFPを増やすために大腸菌に形質転換する（トランスフォーメーション）

方法

トランスフォーメーション

去年のコピペばーじょん☆
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍する
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに100 µlのコンピテント細胞を分注する
↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻す
↓DNAをチューブに1～5 µl加えて、氷上で30分間冷やす
↓42°Cで45秒間熱ショックを与える
↓0.9 mlのSOC培地を加える
↓37°Cで1時間、振りながら回復培養する
↓1 mlをLBプレート(+amp,+kan,+camのいずれか)にまく
↓37°Cで一晩培養する

今年のシエロさんにもろたプリント☆
↓ligation後の反応液を全量、コンピテント細胞(大腸菌)へ加える
↓氷上で15分間冷やす
↓43°Cで30秒間熱ショクを与える
↓氷上で10分間冷やす
↓SOCまたはLB(-)溶液を等量加えて、37°C(API2-MALT1は30°C)で30分間回復培養する
↓LB(+amp)プレートに塗る
↓37°C(API2-MALT1は30°C)で培養する

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 iGEMからのGFPを増やすために大腸菌に形質転換する（トランスフォーメーション）
 <BR><BR>
-方法
+方法<BR>
+<p><strong>トランスフォーメーション</strong></p>
+<BR>
+<font color="#ec6d71">去年のコピペばーじょん☆</font>
+<BR>
+↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍する<BR>
+↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに100 µlのコンピテント細胞を分注する<BR>
+↓余ったコンピテント細胞は-80°Cの冷凍庫に戻す<BR>
+↓DNAをチューブに1～5 µl加えて、氷上で30分間冷やす<BR>
+↓42°Cで45秒間熱ショックを与える<BR>
+↓0.9 mlのSOC培地を加える<BR>
+↓37°Cで1時間、振りながら回復培養する<BR>
+↓1 mlをLBプレート(+amp,+kan,+camのいずれか)にまく<BR>
+↓37°Cで一晩培養する<BR>
+<BR><BR>
+<font color="#89c3eb">今年のシエロさんにもろたプリント☆</font>
 <BR>
-↓氷上でコンピテント細胞（DH5 Alpha 大腸菌体）解凍 <BR>
-↓前もって冷やしておいた1.5mlチューブに100μlのコンピテント細胞を分注する<BR>
-↓DNAをチューブに1~5μl加えて氷上で30分正確に冷やす<BR>
-↓42℃で45秒熱ショックを与える
-↓0.1mlをLBプレート（+amp）にまく
-↓37度で一晩培養
-</body>
+↓ligation後の反応液を全量、コンピテント細胞(大腸菌)へ加える<BR>
+↓氷上で15分間冷やす<BR>
+↓43°Cで30秒間熱ショクを与える<BR>
+↓氷上で10分間冷やす<BR>
+↓SOCまたはLB(-)溶液を等量加えて、37°C(API2-MALT1は30°C)で30分間回復培養する<BR>
+↓LB(+amp)プレートに塗る<BR>
+↓37°C(API2-MALT1は30°C)で培養する</body>
 </html>