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(Cell survival assay)
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== Cell survival assay ==
== Cell survival assay ==
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まくパーツをLB3mlでプレ培養18h。照射するエネルギー量に応じて希釈濃度を変える。 プレートに50μlまいて乾燥させてからUV照射。 可視光を当てないようにアルミ箔で包んでincubate 37℃  
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まくパーツをLB3mlでプレ培養18h。照射するエネルギー量に応じて希釈濃度を変える。 プレートに50μlまいて乾燥させてからUV照射。 可視光を当てないようにアルミ箔で包んでincubate 37℃
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As an initial screen for DNA repair protein activity , we used the UV assay. The cells were plated on respective agar plates at different dilutions, air dried, and then exposed to different doses of UV radiation. Plates were wrapped with aluminum foil and incubated in the dark. Colonyforming units were scored after 16h incubation at 37℃.
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放射線耐性菌D.radioduranceのもつDNA-repair proteinであるPprI,PprA,PprM,RecAをそれぞれ導入した大腸菌にUV照射
== SOS Promoter assay ==
== SOS Promoter assay ==
3mlのLBでプレ培養。それを40mlのLBに100μl加えてincubate 20h。OD600測定しUV照射。2h振盪培養してOD600測定。 遠心沈殿で上澄を捨て、水1mlを加えてvortex。もう一度遠心沈殿で上澄捨てる。アセトン500μl加えて 55℃ vortex 15min   アセトン100%でブランク   A474測定
3mlのLBでプレ培養。それを40mlのLBに100μl加えてincubate 20h。OD600測定しUV照射。2h振盪培養してOD600測定。 遠心沈殿で上澄を捨て、水1mlを加えてvortex。もう一度遠心沈殿で上澄捨てる。アセトン500μl加えて 55℃ vortex 15min   アセトン100%でブランク   A474測定

Revision as of 05:43, 5 October 2011

Cell survival assay

まくパーツをLB3mlでプレ培養18h。照射するエネルギー量に応じて希釈濃度を変える。 プレートに50μlまいて乾燥させてからUV照射。 可視光を当てないようにアルミ箔で包んでincubate 37℃ As an initial screen for DNA repair protein activity , we used the UV assay. The cells were plated on respective agar plates at different dilutions, air dried, and then exposed to different doses of UV radiation. Plates were wrapped with aluminum foil and incubated in the dark. Colonyforming units were scored after 16h incubation at 37℃.

放射線耐性菌D.radioduranceのもつDNA-repair proteinであるPprI,PprA,PprM,RecAをそれぞれ導入した大腸菌にUV照射

SOS Promoter assay

3mlのLBでプレ培養。それを40mlのLBに100μl加えてincubate 20h。OD600測定しUV照射。2h振盪培養してOD600測定。 遠心沈殿で上澄を捨て、水1mlを加えてvortex。もう一度遠心沈殿で上澄捨てる。アセトン500μl加えて 55℃ vortex 15min   アセトン100%でブランク   A474測定