From 2011.igem.org
9/6(火)
吉村、中川
プライマー設計
【目的】
pUAST Fiag-tag dMLFからFiag-tag dMLFを単離・増殖させる。
【実験方法】
pUAST Fiag-tag dMLFからの Fiag-tag
dMLFの上流にEcoRⅠ、XbaⅠの制限酵素サイト、下流にSpeⅠ、Pst Ⅰの制限酵素サイトがあるようにプライマー設計をした。
【実験結果】
F:AAAGAATTCAAATCTAGAAAAATGGACTACAAGGACGA
EcoRⅠ XbaⅠ
Tm値:72.14℃ 38塩基
R:AAACTGCAGAAAACTAGTAAATACCCTACTTCTTCTTGCC
PstⅠ SpeⅠ
Tm値:72.16℃ 40塩基
9/12(月)
吉村、中川
PCR
【目的】
9/6に作製したプライマーを用いてをFlag-tag dMLFを増幅させる
【実験方法】
以下の2条件で各1サンプルずつPCRを行った。
10 µM Primer F | 1.5 µl |
10 µM Primer R | 1.5 µl |
Template DNA | 1 µl |
10 x PCR Buffer for KOD Plus | 5 µl |
dNTPs | 4 µl |
MgSO4 | 4 µl |
ddH2O | 32 µl |
KOD Plus | 1 µl |
| total 50 µl |
| | |
Pre-Denature | 95°C | 30sec | |
Denature | 95°C | 30sec | 30 Cyle |
Anneling | (Tm-5)°C | 1min |
Extension | 68°C | 1kb/min |
End | 4°C | keep | |
|
10 µM Primer F | 1.5 µl |
10 µM Primer R | 1.5 µl |
Template DNA | 1 µl |
10 x PCR Buffer for KOD Plus | 5 µl |
dNTPs | 4 µl |
MgSO4 | 2 µl |
ddH2O | 34 µl |
KOD Plus | 1 µl |
| total 50 µl |
| | |
Pre-Denature | 95°C | 30sec | |
Denature | 95°C | 30sec | 30 Cyle |
Anneling | (Tm-5)°C | 1min |
Extension | 68°C | 1kb/min |
End | 4°C | keep | |
|
各サンプルを回収し、-20゜Cで保存した。
【結果】
アガロースゲル電気泳動に続く
9/13(火)
吉村
アガロースゲル電気泳動
【目的】
【実験方法】
【結果】
【考察】