From 2011.igem.org
9/6(火)
吉村、中川
プライマー設計
【目的】
pUAST Fiag-tag dMLFからFiag-tag dMLFを単離・増殖させる。
【実験方法】
pUAST Fiag-tag dMLFからの Fiag-tag
dMLFの上流にEcoRⅠ、XbaⅠの制限酵素サイト、下流にSpeⅠ、Pst Ⅰの制限酵素サイトがあるようにプライマー設計をした。
【実験結果】
F:AAAGAATTCAAATCTAGAAAAATGGACTACAAGGACGA
EcoRⅠ XbaⅠ
Tm値:72.14℃ 38塩基
R:AAACTGCAGAAAACTAGTAAATACCCTACTTCTTCTTGCC
PstⅠ SpeⅠ
Tm値:72.16℃ 40塩基
9/12(月)
吉村、中川
PCR
【目的】
9/6に作製したプライマーを用いてをFlag-tag dMLF増幅させる
【実験方法】
以下の条件でPCRを行った。
10 µM GFP Primer F | 1.5 µl |
10 µM GFP Primer R | 1.5 µl |
鋳型 DNA | 1 µl |
10 x PCR Buffer for KOD Plus | 5 µl |
dNTPs | 4 µl |
MgSO4 | 4 µl |
ddH2O | 32 µl |
KOD Plus | 1 µl |
| 全量 50 µl |
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Start | 95°C、30秒 |
Cycle x 30 | 95°C、30秒(熱変性) |
(Tm-5)°C、1分(アニーリング) |
68°C、1kb/分(伸長) |
End | 4°Cで保持 |
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【結果】
アガロースゲル電気泳動に続く