Team:KIT-Kyoto/れおぽん実験9月
From 2011.igem.org
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【実験方法】<br> | 【実験方法】<br> | ||
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- | <tr><td align=center>PCR条件</td></tr> | + | <tr><td align=center>PCR条件(1)</td></tr> |
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+ | <tr><td width="150px" align=center>10 µM Flag-MLF Primer F</td><td width="100px" align=right>1.5 µl</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=center>10 µM Flag-MLF Primer R</td><td align=right>1.5 µl</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=center>鋳型 DNA</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=center>10 x PCR Buffer for KOD Plus</td><td align=right>5 µl</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=center>dNTPs</td><td align=right>4 µl</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=center>MgSO<sub>4</sub></td><td align=right>2 µl</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=center>ddH<sub>2</sub>O</td><td align=right>34 µl</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=center>KOD Plus</td><td align=right>1 µl</td></tr> | ||
+ | <tr><td> </td><td align=right>全量 50 µl</td></tr> | ||
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+ | <tr><td align=center>Cycle条件</td></tr> | ||
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+ | <tr><td width="100px" align=center>Start</td><td width="200px" align=right>95°C、30秒</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=center rowspan=3>Cycle x 30</td><td align=right>95°C、30秒(熱変性)</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=right>(Tm-5)°C、1分(アニーリング)</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=right>68°C、1kb/分(伸長)</td></tr> | ||
+ | <tr><td align=center>End</td><td align=right>4°Cで保持</td></tr> | ||
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+ | 各サンプルを回収し、-20゜Cで保存した。 | ||
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【実験方法】<br> | 【実験方法】<br> | ||
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+ | 【結果】<br> | ||
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+ | 【考察】<br> | ||
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Revision as of 12:28, 20 September 2011
9/6(火)
吉村、中川
プライマー設計
【目的】
pUAST Fiag-tag dMLFからFiag-tag dMLFを単離・増殖させる。
【実験方法】
pUAST Fiag-tag dMLFからの Fiag-tag
dMLFの上流にEcoRⅠ、XbaⅠの制限酵素サイト、下流にSpeⅠ、Pst Ⅰの制限酵素サイトがあるようにプライマー設計をした。
【実験結果】
F:AAAGAATTCAAATCTAGAAAAATGGACTACAAGGACGA
EcoRⅠ XbaⅠ
Tm値:72.14℃ 38塩基
R:AAA 9/12(月)
PstⅠ SpeⅠ
Tm値:72.16℃ 40塩基
吉村、中川
PCR
【目的】
9/6に作製したプライマーを用いてをFlag-tag dMLFを増幅させる
【実験方法】
以下の2条件で各1サンプルずつPCRを行った。
PCR条件(1)
10 µM Flag-MLF Primer F 1.5 µl 10 µM Flag-MLF Primer R 1.5 µl 鋳型 DNA 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 4 µl ddH2O 32 µl KOD Plus 1 µl 全量 50 µl
Cycle条件
Start 95°C、30秒 Cycle x 30 95°C、30秒(熱変性) (Tm-5)°C、1分(アニーリング) 68°C、1kb/分(伸長) End 4°Cで保持
PCR条件(2)
10 µM Flag-MLF Primer F 1.5 µl 10 µM Flag-MLF Primer R 1.5 µl 鋳型 DNA 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 2 µl ddH2O 34 µl KOD Plus 1 µl 全量 50 µl
Cycle条件
Start 95°C、30秒 Cycle x 30 95°C、30秒(熱変性) (Tm-5)°C、1分(アニーリング) 68°C、1kb/分(伸長) End 4°Cで保持
各サンプルを回収し、-20゜Cで保存した。
【結果】
アガロースゲル電気泳動に続く
9/13(火)
吉村
アガロースゲル電気泳動
【目的】
【実験方法】
【結果】
【考察】