Team:KIT-Kyoto/れおぽん実験9月
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Revision as of 14:55, 18 September 2011
9/6(火)
吉村、中川
プライマー設計
【目的】
pUAST Fiag-tag dMLFからFiag-tag dMLFを単離・増殖させる。
【実験方法】
pUAST Fiag-tag dMLFからの Fiag-tag
dMLFの上流にEcoRⅠ、XbaⅠの制限酵素サイト、下流にSpeⅠ、Pst Ⅰの制限酵素サイトがあるようにプライマー設計をした。
【実験結果】
F:AAAGAATTCAAATCTAGAAAAATGGACTACAAGGACGA
EcoRⅠ XbaⅠ
Tm値:72.14℃ 38塩基
R:AAA 9/12(月)
PstⅠ SpeⅠ
Tm値:72.16℃ 40塩基
吉村、中川
PCR
【目的】
9/6に作製したプライマーを用いてをFlag-tag dMLFを増幅させる
【実験方法】
以下の条件でPCRを行った。
PCR条件
10 µM Flag-MLF Primer F 1.5 µl 10 µM Flag-MLF Primer R 1.5 µl 鋳型 DNA 1 µl 10 x PCR Buffer for KOD Plus 5 µl dNTPs 4 µl MgSO4 4 µl ddH2O 32 µl KOD Plus 1 µl 全量 50 µl
Cycle条件
Start 95°C、30秒 Cycle x 30 95°C、30秒(熱変性) (Tm-5)°C、1分(アニーリング) 68°C、1kb/分(伸長) End 4°Cで保持
【結果】
アガロースゲル電気泳動に続く