Team:KIT-Kyoto/ぷろとこる

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Revision as of 15:18, 25 August 2011

ぷろとこるうｐページ(^ω^)/

LB培地

bacto tryptone	10 g
bacto yeast evtract	5 g
NaCl	10 g

LB培地用の試薬を計り、ビーカーに入れる
↓950 mlの蒸留水を入れ、スターラーで混ぜて溶かす
↓三角フラスコに分注し、アルミ箔で二重にフタをして
121 ℃で20分オートクレーブ滅菌する

LBプレート

LB培地
bacto-agar	15 g/l
アンピシリン	50 µg/ml

LB培地を作製する。
↓1 Lあたり15 gのbacto-agarを入れて、オートクレーブ滅菌する
↓オートクレーブから取り出し、冷めないうちにスターラーで均一になるまで撹拌する
↓65 ℃程度に冷めたら、アンピシリンを1 mlあたり50 µg加える
↓10 cmのディスポプラスチックシャーレ1枚につき、20～25 ml分注する
水平な所に置いて固まらせる

トランスフォーメーション

去年のコピペばーじょん☆
↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍する
↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに100 µlのコンピテント細胞を分注する
↓余ったコンピテント細胞は-80 ℃の冷凍庫に戻す
↓DNAをチューブに1～5 µl加えて、氷上で30分間冷やす
↓42 ℃で45秒間熱ショックを与える
↓0.9 mlのSOC培地を加える
↓37 ℃で1時間、振りながら回復培養する
↓1 mlをLBプレート(+amp,+kan,+camのいずれか)にまく
↓37 ℃で一晩培養する

今年のシエロさんにもろたプリント☆
↓ligation後の反応液を全量、コンピテント細胞(大腸菌)へ加える
↓氷上で15分間冷やす
↓43 ℃で30秒間熱ショクを与える
↓氷上で10分間冷やす
↓SOCまたはLB(-)溶液を等量加えて、37 ℃(API2-MALT1は30 ℃)で30分間回復培養する
↓LB(+amp)プレートに塗る
↓37 ℃(API2-MALT1は30 ℃)で培養する

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 <p><strong>トランスフォーメーション</strong></p>
+<BR>
+<font color="#d9333f">去年のコピペばーじょん☆</font>
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 ↓氷上でコンピテント細胞(DH5 Alpha:大腸菌株)を解凍する<BR>
-↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに100 μlのコンピテント細胞を分注する<BR>
+↓前もって冷やしておいた1.5 mlチューブに100 µlのコンピテント細胞を分注する<BR>
-↓余ったコンピテント細胞は-80 °Cの冷凍庫に戻す<BR>
+↓余ったコンピテント細胞は-80 ℃の冷凍庫に戻す<BR>
-↓DNAをチューブに1～5 μl加えて、氷上で30分間冷やす<BR>
+↓DNAをチューブに1～5 µl加えて、氷上で30分間冷やす<BR>
-↓42 °Cで45秒間熱ショックを与える<BR>
+↓42 ℃で45秒間熱ショックを与える<BR>
 ↓0.9 mlのSOC培地を加える<BR>
-↓37 °Cで1時間、振りながら回復培養する<BR>
+↓37 ℃で1時間、振りながら回復培養する<BR>
 ↓1 mlをLBプレート(+amp,+kan,+camのいずれか)にまく<BR>
-↓37 °Cで一晩培養する<BR>
+↓37 ℃で一晩培養する<BR>
+<BR><BR>
+<font color="#006e54">今年のシエロさんにもろたプリント☆</font>
+<BR>
+↓ligation後の反応液を全量、コンピテント細胞(大腸菌)へ加える<BR>
+↓氷上で15分間冷やす<BR>
+↓43 ℃で30秒間熱ショクを与える<BR>
+↓氷上で10分間冷やす<BR>
+↓SOCまたはLB(-)溶液を等量加えて、37 ℃(API2-MALT1は30 ℃)で30分間回復培養する<BR>
+↓LB(+amp)プレートに塗る<BR>
+↓37 ℃(API2-MALT1は30 ℃)で培養する<BR>